白介素-8 ELISA KIT

白介素-8 ELISA KIT 

白介素-8 ELISA KIT 是科研及临床前期研究中常用的检测工具，用于定量测定多种生物样本中的白介素 - 8（IL-8）含量 。

1. 检测原理：采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。试剂盒的微孔板上预包被了针对 IL-8 的特异性抗体。加入样本后，样本中的 IL-8 与固相抗体结合。接着加入酶标记的抗 IL-8 抗体，其与已结合在固相上的 IL-8 形成 “固相抗体 - IL-8 - 酶标抗体” 复合物。经过洗涤去除未结合物质，加入底物溶液（如 TMB），在酶的催化下，底物发生显色反应，颜色深浅与样本中 IL-8 的含量成正比。通过酶标仪在特定波长（通常为 450nm）下测量吸光度，与标准曲线对比，从而计算出样本中 IL-8 的浓度 。

2. 试剂盒组成

• 酶联板：已包被抗 IL-8 抗体，有 96 孔或 48 孔规格，是反应的载体。

• 标准品：一般为冻干品，需用试剂盒提供的标准品稀释液复溶并稀释成不同浓度梯度，如 0、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL 等，用于绘制标准曲线。

• 样本xi释液：用于稀释浓度过高的待测样本，确保其浓度在试剂盒的检测范围内。

• 酶标抗体：即 HRP 标记的抗 IL-8 抗体，为浓缩液，使用时需按要求用酶标抗体稀释液稀释。

• 酶标抗体稀释液：专门用于稀释酶标抗体。

• 底物溶液：如 TMB 底物，与酶标抗体中的 HRP 发生反应产生颜色变化。

• 洗涤液：通常为浓缩液，使用时需按比例用蒸馏水或去离子水稀释，用于洗涤酶联板，去除未结合的物质，减少背景干扰。

• 终止液：一般为强酸溶液（如硫酸），用于终止底物的显色反应，使反应液颜色稳定，便于读数 。

• 封板膜：用于在温育过程中覆盖酶联板，防止液体蒸发和外界污染 。

• 使用说明书：详细介绍试剂盒的使用方法、注意事项、性能指标等 。

3. 样本要求

• 血清：采集血液后，室温放置 2 小时或 4℃过夜，1000×g 离心 20 分钟，取上清备用。采血应使用无热原、无内毒素的一次性器材 。

• 血浆：可用 EDTA、肝素等抗凝剂。样本采集后 30 分钟内，2 - 8℃下 1000×g 离心 15 分钟，取上清 。

• 细胞培养上清：将细胞培养上清 1000×g 离心 20 分钟，去除细胞碎片和杂质后取上清 。

• 组织匀浆：用预冷的 PBS 冲洗组织，去除残留血液，剪碎组织后按 1:9（w/v）加入 PBS，冰上充分研磨。再经 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清用于检测 。

• 样本采集后若短期内检测，可 4℃保存；若长时间保存，需 - 20℃或 - 80℃冻存，且避免反复冻融，溶血样本一般不适合检测 。

4. 操作流程

• 准备工作：从冰箱取出试剂盒，平衡至室温（约 30 分钟）。稀释浓缩洗涤液。

• 加样：设置空白孔、标准品孔和样本孔。空白孔加样本xi释液，标准品孔加入不同浓度的标准品，样本孔加入处理好的样本，每孔加样量通常为 100μL，轻轻混匀，37℃温育 90 分钟 。

• 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液加满各孔，浸泡 1 - 2 分钟后甩干，重复洗涤 5 次，确保洗净未结合物质 。

• 加酶标抗体：每孔加入 100μL 稀释好的酶标抗体工作液，37℃温育 60 分钟 。

• 再次洗涤：同上述洗涤步骤 。

• 显色：每孔加入 90μL 底物溶液，轻轻混匀，37℃避光显色 15 - 30 分钟（根据实际显色情况判断） 。

• 终止反应：每孔加入 50μL 终止液，此时溶液颜色由蓝色变为黄色 。

• 读数：在加终止液后 15 分钟内，用酶标仪在 450nm 波长处测量各孔的吸光度（OD 值） 。

• 计算结果：以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。根据样本的 OD 值从标准曲线中查出对应的浓度，若样本进行了稀释，需乘以相应的稀释倍数得到实际浓度 。

5. 性能指标

• 检测范围：常见为 31.2 - 2000 pg/mL 等不同区间，能满足多种样本中 IL-8 含量的检测需求 。

• 灵敏度：可低至 15.6 pg/mL 甚至更低，能检测到样本中微量的 IL-8 。

• 特异性：对 IL-8 具有高度特异性，与其他细胞因子等物质无明显交叉反应 。

• 重复性：板内变异系数一般小于 10%，板间变异系数小于 15%，保证了检测结果的稳定性和可靠性 。

6. 注意事项

• 严格按照说明书操作，不同批次试剂盒试剂不能混用 。

• 操作过程中使用一次性吸头，避免交叉污染，加样要准确 。

• 洗涤充分是保证结果准确的关键，洗板不che底易导致假阳性 。

• 底物溶液对光敏感，需避光保存和使用，显色反应要在避光条件下进行 。

• 终止液有腐蚀性，操作时注意防护，避免接触皮肤和眼睛 。

• 建议标准品和样本均做复孔检测，以提高结果准确性 。该试剂盒仅用于科研，不可用于临床诊断 。