小鼠流感模型构建
- 公司名称 上海达为科生物科技有限公司
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- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2025/7/9 10:16:28
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一、模型建立核心要素
（一）病毒毒株与适应株
常用毒株：
H1N1 PR8（A/Puerto Rico/8/34）：标准实验室株，致病性稳定，广泛用于基础研究。
H9N2（A/swine/Jiangsu/C1/08）与 H1N1 SD731（A/swine/Shandong/731/2009）：用于模拟亚型特异性感染。
新甲型H1N1：需通过鼠肺传代获得适应株（如SC/09），提高小鼠致死率。
病毒制备：
扩增：病毒接种9-11日龄SPF鸡胚，收获尿囊液分装保存（-80℃）。
滴度：感染剂量通常为 1×10? TCID??/50μL 或 250 PFU（鼻内接种）.
（二）感染途径与方法
| 感染方式 | 操作要点 | 适用场景 |
|---|---|---|
| 鼻内接种 | 麻醉小鼠后滴鼻接种病毒悬液（50μL） | 操作简单，模拟上呼吸道感染 |
| 气雾攻击 | 雾化H1N1 FM1/PR8病毒，小鼠吸入感染 | 更接近自然感染，但需专用设备 |
| 颅内注射 | 注射病毒至耳根与眼角连线处（0.03mL, TCID??=10??） | 神经系统感染研究（如脑炎） |
| 双重感染模型 | 先接种流感病毒（H3N2），3天后感染HSV-1，检测细胞因子与免疫细胞变化 | 研究病毒共感染机制 |
关键参数：
麻醉推荐异氟醚（安全可控）或干冰（快速）。
气雾感染需控制雾化颗粒直径（1-5μm）以深入肺泡。
（三）动物品系选择
| 品系 | 病毒敏感性 | 病理特征 |
|---|---|---|
| BALB/c | 中高度敏感，H1N1感染后肺损伤显著 | 炎症因子（IL-6、TNF-α）升高明显 |
| C57BL/6 | 对H3N2抵抗较强，H1N1易感性中等 | 适合免疫机制研究（T细胞应答） |
| DBA/2J | 高敏感性（尤其H1N1），体重减轻显著、死亡率高 | 强细胞因子风暴，肺病理损伤更重 |
| ICR | 广谱易感，气雾感染后肺指数升高快 | 适合急性感染病理观察 |
注：
雌性BALB/c小鼠更常用（体重15-20g，SPF级）。
DBA/2J品系可增强发病症状，但需注意高死亡率风险。
二、疾病进程与评估指标
（一）临床监测
生存指标：
体重下降：感染后3天开始下降，>20%需人道终点处理。
存活率：重度模型（如PR8）感染后7天死亡率可达80%。
行为评分：
活动减少、扎堆蜷缩、呼吸急促、毛发脱落。
体温变化：
非发热模型：核心体温下降（与人类发热相反）。
湿热证模型：高脂饲料+热应激后肛温升高（表1）：
| 组别 | 肛温（℃） |
|---|---|
| 正常组 | 36.8±0.3 |
| 病毒组 | 35.2±0.4a |
| 模型组 | 37.5±0.6ab |
（二）器官损伤评估
肺指数（核心指标）：
公式：肺指数 = 肺湿重（g）/ 体重（g） × 100。
阳性标准：感染组肺指数显著高于对照组（P<0.05）。
肺病理分级：
+：炎细胞浸润，毛细血管充血；
++：肺泡渗出物增多，部分实变；
+++：肺组织大面积实变。
多器官指标：
肝损伤：ALT/AST升高。
肾损伤：血肌酐（Cre）≥2倍基础值。
（三）分子与免疫检测
| 检测类别 | 指标 | 技术方法 |
|---|---|---|
| 病毒载量 | 肺匀浆病毒滴度、RT-qPCR检测病毒RNA | 细胞病变效应（CPE）、空斑试验 |
| 炎症因子 | IL-6、TNF-α、IFN-γ | ELISA（血清/肺泡灌洗液） |
| 免疫细胞变化 | NK细胞、T细胞亚群（CD4?/CD8?）、树突状细胞 | 流式细胞术 |
| 血氧与组织缺氧 | 血氧饱和度（SpO?） | MouseOx Plus脉搏xue氧仪 |
动态监测：
炎症峰值：感染后12-24h（IL-6、TNF-α）。
器官衰竭期：24-48h（肺实变、血氧骤降）
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