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公司动态
DNA片段纯化常见问题
点击次数：3796 发布时间：2011-5-23
DNA片段纯化常见问题
1、DNA回收率低
A、溶胶液用量过少
准确计算凝胶的重量，按比例加入溶胶液。
B、凝胶块未*融化
加入溶胶液后，置于55℃~60℃进行水浴，如有必要加入更多量的溶胶液。
C、电泳缓冲液使用时间过长，不新鲜
换用新配制的电泳缓冲液。
D、片段过小，<200 bp
加入1倍体积的异丙醇。
E、片段>10kb
加入洗脱液后，将吸附柱置于60℃，温育15分钟后进行离心洗脱。
F、洗脱液使用不正确
洗脱液pH在7.0~8.5之间时洗脱效果，pH过高或者过低，都将显著影响洗脱效率，请使用试剂盒配送的洗脱液进行洗脱（10 mM Tris-HCL，pH8.5），使用ddH2O洗脱时请保证pH值在此范围内。
G、洗脱液加入位置不正确
使用较小洗脱体积洗脱时，洗脱液应加在膜的中央。
H、起始产物量低
若初始回收产物的量很低，应先富集，增大起始产物量。
2、未回收到DNA
DNA Wash Buffer中未加入乙醇
加入规定用量的无水乙醇，使用后旋紧瓶盖，以防乙醇挥发
3、电泳时，样品飘出点样孔或后续酶反应实验不理想
乙醇残留：洗脱前，应确保乙醇已去除干净，可再次离心，以*去除残留的乙醇后在进行洗脱操作。
4、柱子堵塞
凝胶未*融化：加入溶胶液后，置于55℃~60℃进行水浴，待凝胶*融化，冷却至室温后再过柱。
A、溶胶液用量过少
准确计算凝胶的重量，按比例加入溶胶液。
B、凝胶块未*融化
加入溶胶液后，置于55℃~60℃进行水浴，如有必要加入更多量的溶胶液。
C、电泳缓冲液使用时间过长，不新鲜
换用新配制的电泳缓冲液。
D、片段过小，<200 bp
加入1倍体积的异丙醇。
E、片段>10kb
加入洗脱液后，将吸附柱置于60℃，温育15分钟后进行离心洗脱。
F、洗脱液使用不正确
洗脱液pH在7.0~8.5之间时洗脱效果，pH过高或者过低，都将显著影响洗脱效率，请使用试剂盒配送的洗脱液进行洗脱（10 mM Tris-HCL，pH8.5），使用ddH2O洗脱时请保证pH值在此范围内。
G、洗脱液加入位置不正确
使用较小洗脱体积洗脱时，洗脱液应加在膜的中央。
H、起始产物量低
若初始回收产物的量很低，应先富集，增大起始产物量。
2、未回收到DNA
DNA Wash Buffer中未加入乙醇
加入规定用量的无水乙醇，使用后旋紧瓶盖，以防乙醇挥发
3、电泳时，样品飘出点样孔或后续酶反应实验不理想
乙醇残留：洗脱前，应确保乙醇已去除干净，可再次离心，以*去除残留的乙醇后在进行洗脱操作。
4、柱子堵塞
凝胶未*融化：加入溶胶液后，置于55℃~60℃进行水浴，待凝胶*融化，冷却至室温后再过柱。