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羟自由基清除能力测定试剂盒说明书

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羟自由基清除能力测定试剂盒说明书

可见分光光度法

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子,造成细胞结构和功能受损,进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类

保健品和药品研究中得到广泛应用。

测定原理

H2O2/ Fe2+通过Fenton 反应产生羟自由基,将邻二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化为Fe3+,导致 536nm吸光度下降,样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度,反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品

可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体 50 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 8 mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 20 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 5 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 5 mL×1 瓶,4℃保存。

样品的制备

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,

加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。

3. 提取物(或者药物)可配制成一定浓度,如 5 mg/mL。

操作步骤

 

空白管

对照管

测定管

试剂一(µL)

150

150

150

试剂二(µL)

400

400

400

试剂三(µL)

100

100

100

立即混匀,防止局部颜色过浓

样品(µL)

 

 

250

试剂四(µL)

 

100

100

H2O(µL)

350

250

 

混匀、37℃,60min,双蒸水调零,测定 OD 536

注意:空白管和标准管只需测定一次。

计算公式

羟自由基清除率 D% =(OD测定管- OD对照管)÷OD空白管-OD对照管×100%

 

 

注意事项

为了比较不同样品羟自由基清除能力,对于同一批样品必须加入等量的样品,血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。

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