H2S 含量测定试剂盒说明书

H2S 含量测定试剂盒说明书

可见分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定   

产品内容：  

提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存。 

试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。 

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。 

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。 

试剂四：液体15mL×1 瓶，4℃保存。 

试剂五：液体 3mL×1 管，4℃避光保存。 

产品说明： 

H2S 是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。 

H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在 665nm处有大吸收峰，通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。

需自备的仪器和用品：  

天平、低温离心机、可见分光光度计1ml玻璃比色皿、蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理： 

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 ⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。 

3. 血清（浆）：直接测定。

二、测定步骤： （取1.5ml离心管，按照下表操作） 

三、H2S含量计算公式：

标准曲线回归方程为：y = 0.0044x，R² = 0.9988

（1）组织样品 

a.按照蛋白浓度计算 

H2S（μmol/mg prot）= A665÷0.0044×V反总÷(V样×Cpr)×10^-3=0.727×A665÷Cpr

b.按照样本重量计算 

H2S（μmol/g）= A665÷0.0044×V反总÷(V样÷V样总×W)×10^-3 = 0.727×A665÷W

（2）液体样本

 H2S（μmol/L）= A665÷0.0044×V反总÷V样= 727×A665

（3）细胞 

H2S（μmol/10⁴ cell）= A665÷0.0044×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量(万个)）×10^-3 =0.727×A665÷细胞数量（万个）

V反总：反应总体积，0.8mL；V样：反应中样品体积，0.25mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL。

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