甘油三酯（ TG） 含量检测试剂盒说明书

甘油三酯（ TG） 含量检测试剂盒说明书

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格：100T/96S 产品内容：

试剂一：自备，取玻璃空瓶，加入 60mL 正庚烷，60mL 异丙醇，盖紧后混匀，4℃保存。

试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂六：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂×1 瓶，临用前加 5mL 试剂一，即 1mg/mL 甘油三酯标准溶液，4℃保存。

产品说明：

TG 是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。 测定原理： 用异丙醇抽提取 TG，KOH 皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛， 在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，在 420 nm 有特征吸收峰，其颜色的深浅与 TG 含量成正比。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、双蒸水、125mL 玻璃空瓶。

操作步骤:

一、TG 的提取：

1、 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清待测。

2、 细胞、细菌：先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1mL 试剂一，超声波破碎

1min（强度 20％，超声 2s，停 1s），8000g， 4℃离心 10min，取上清待测。

3、 血清（浆）等液体样品：直接测定。二、测定操作：

1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 420 nm，蒸馏水调零。

2.水浴锅预热到 65℃。

空白管标准管测定管

双蒸水（µL）40

标准液（µL）40

TG 待测液（µL）40

试剂一（µL）125125125

试剂二（µL）252525

加试剂一后充分混匀，再加试剂二，剧烈振荡 30s，静置，待分层后取上层溶液 15µL，置于新的 EP 管中。

3.甘油三酯含量测定：

空白管标准管测定管

上层溶液（µL）151515

试剂三 （µL）505050

试剂四（µL）151515

充分混匀，65℃水浴 3min

试剂五（µL）505050

试剂六（µL）505050

充分混匀，65℃水浴 15min

转移至微量比色皿/96 孔板测定 420nm 处吸光度，记为 A 空，A 标和 A 测。注意：空白管和标准管只需测定一次。

三、计算公式：

1.血清（浆）中甘油三酯含量：

TG 含量（mg/dL）=C  标准品×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）

=（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）

C 标准品：1mg/mL；100：单位换算系数，1dL=100 mL。

2.组织中甘油三酯含量：

(1)按样本蛋白浓度计算

TG 含量（mg/ mg prot）= C  标准品×V×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷（Cpr×V）

=（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷ Cpr

(2)按样本鲜重计算

TG 含量（mg/ g 鲜重）=C  标准品×V×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷W

=（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷ W

C 标准品：1mg/mL ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；V：加入试剂一的体积，

1mL。

3.细胞、细菌中甘油三酯含量：

TG 含量（mg/104 cell）=C 标准品×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷细菌或细胞密度

=（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷细菌或细胞密度

C 标准品：1mg/mL；细菌或细胞密度：104 cell /mL。

注意事项：

1.试剂盒中有易挥发性物质，实验过程中需佩戴手套和口罩，试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。

2.加试剂二后需剧烈震荡，使待测液中甘油三酯得到充分提取。

3.最低检出限为 100µ mol/L。

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