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上海桥星贸易有限公司
主营产品： 进口透析袋,密理博ECL发光液,B27无血清培养基,Gibco胶原酶 |
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2016-2-23 阅读(1070)
| 提 供 商 | 上海桥星贸易有限公司 | 资料大小 | 20.2KB |
|---|---|---|---|
| 资料图片 | 下载次数 | 104次 | |
| 资料类型 | PNG 图片 | 浏览次数 | 1070次 |
TRIZOL简介：
TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。
TRIzol在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化DNA及标准化RNA的生产十分有用。
TRIzol的成分
TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能*抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。
※0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
TRIzol的使用方法
用匀浆器将组织磨碎，加入TRIzol处理组织。5分钟后加入氯仿，以每分钟12000转离心5分钟，样品即分成水样层、中间层和有机层。
※RNA存在于水样层中，收集水样层后可以通过异丙醇沉淀RNA来还原。
※在除去水样层后，有机层中的DNA和蛋白质也能相继以沉淀的方式还原：乙醇能使中间层的DNA沉淀析出，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白质。
每100ml TRIzol可以抽提100个六孔板中的样品或100个50-80mg的组织样品。无论样品是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织（50-100mg）和细胞（约五百万个）及大量的组织（≥1g）和细胞（超过一千万个）均有较好的分离效果。
每一百万细胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA，每毫克组织用TRIzol抽提可得1-10微克RNA（产量因细胞和组织不同而异）。
TRIzol操作上的简便性允许其同时处理多个样品，所有的操作可以在一小时内完成。
TRIzol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白质的污染，故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly（A）+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和单分子克隆（PCR）。
※如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用级联扩大的DNase I（Cat. No. 18068）来处理抽提的总RNA。
※TRIzol试剂能促进不同种属、不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA经过琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7kb和15kb之间的不连续的高分子量条带（mRNA和hnRNA成分），两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb （28S）和~2 kb （18S），低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 （tRNA, 5S）。当抽提的RNA用TE稀释时，其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA时宜-70℃沉淀。
TRIzol对人体有害，使用时应戴一次性手套，注意防止溅出。
