PriboFast维生素B12免疫亲和柱

【产品描述】

免疫亲和柱可用于食品/饲料中维生素B12的萃取液的净化处理，性能稳定，操作简单快速。柱内含有维生素

B12抗体，以共价键形式粘附于凝胶颗粒上。

【仪器试剂】

【样品准备】

所有水状溶液都可作为样品检测，但要确保其pH为7±0.5，否则，先用1N盐酸或NaOHpH。如果样品不清澈，需先离心，以免阻塞免疫亲和柱。

固体样品

1）一般的水溶性样品可以溶解后直接分析。将样品溶解于双蒸水后，调节pH为7±0.5，注意要预先除去混浊物。

2）可以选择离心、过滤、Carrez试剂沉淀等方法净化样品。取样品溶液5ml分别加入250ul Carrez I 试剂和250ulCarrez II试剂，然后离心除去沉淀物。

3）难溶于冷水的样品，可通过温育加热使其溶解。

4）对于不溶性如谷物类样品，要先将样品进行粉碎成中细粒粉末，称取2g样品溶于10ml双蒸水中，振荡器上震荡30分钟（120次/分）。也可用磁转子混匀。然后将溶液过滤或在3000转离心5分钟，调节pH为7±0.5，然后用于过柱。

液体样品

1）对于高脂性样品奶油类，为分离脂肪，需先低温离心15分钟（2-8℃，3000转）。

2）除去脂肪层后直接将样品过柱。如果样品是高度粘稠，还需用0.01M的PBS溶液进行稀释（按1:2－1:10的倍数）。

3) 富含蛋白样品需预先除去蛋白。每5ml样品中加入20ul浓盐酸(36％)，在60℃温育45分钟。然后离心10分钟(3000转)，用1N的盐酸调节pH到7±0.5

10分钟(3000转)，用1N的盐酸调节pH到7±0.5

【操作步骤】

1）每个样品需用一个新柱子；

2）将柱子和样品溶液处于室温；

3）取下免疫亲和柱的塞子，割下塞子上突出的部分，将这个不再密封的塞子放回柱子上；

4）将柱子与注射器连接，用铁夹子整个固定起来。柱子下面放一个烧杯。

5）将准备好的样品溶液加入注射器里，并取下柱底部的盖子。

6）样品溶液在重力下过柱；

7过完柱后用10ml蒸馏水到注射器清洗，过柱。水流过柱子后，用推杆让1-2倍的空气再经过柱子。

8）将干净的试管放在柱子底部。加1ml纯甲醇到（干的）注射器里，重力下通过柱子。如果甲醇过柱的速度慢，可以在过柱开始时用压力泵（尽量不要全程使用压力泵）。提取的时间不要少于1分钟。

9）让部分空气通过柱子，收集剩余的甲醇洗提液。

10）取50μl加到HPLC进样。