细胞实验中支原体污染是较为麻烦的问题,困扰着很多科研人。今天跟大家分享的是实验室支原体检测方法。
培养法:使用支原体肉汤培养基接种待测样品(细胞培养上清等),经过约7-21天的培养,观察有无支原体的生长,以此来判断细胞培养基中有无支原体存在。该方法虽然经济可靠,但实验周期较长,所以常用来进行对怀疑细胞的最后甄别。
荧光指示细胞法:该方法较为快捷,方法简单,但其灵敏度有一定的欠缺,易造成漏检。
PCR法:PCR 法检测支原体的方法最为快速、灵敏、取样量少,既可做细胞本身,也可做细胞上清的检测,同时可以检测多种支原体的污染,是目前常用的检测手段。但其成本较高,条件要求严格,且有时易出现假阳性或假阴性。弥补的方法是对怀疑的样品要经过3 次PCR 检测,或用培养法检测。
DNA染色法:使用DNA染色试剂(如:Hoechst 33258)对细胞进行染色,由于支原体中的核酸也可以被着色,所以,如果有支原体污染,会在细胞表面或者培养基中见到大小不等、不规则的荧光着色颗粒,与细胞核呈现的椭圆形、更大更亮荧光形成鲜明对比。
不同的实验室可根据具体情况选择不同的方法或几种方法联合使用以保证检测的准确性和灵敏度。