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140次植物ATP酶(ATPase)ELISA试剂盒实验使用说明书
BS-7929 植物ATP酶(ATPase)ELISA试剂盒
以下是植物ATP酶(ATPase)ELISA试剂盒的实验使用说明书综合指南:
一、检测原理
采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA):
微孔板预包被ATP酶抗体,依次加入样本、标准品和HRP标记检测抗体
经温育洗涤后,TMB底物在过氧化物酶催化下显色(蓝→黄),颜色深度与ATP酶浓度正相关
用酶标仪在450nm波长测定OD值,计算样品活性或浓度
二、样本处理要求
样本类型 处理方法
血清/血浆 采集后1000×g离心15-20分钟,避免使用含NaN3的抗凝剂(抑制HRP活性)
植物组织 匀浆后1000×g离心20分钟取上清,分装冻存于-20℃(避免反复冻融)
细胞上清液 1000×g离心10分钟去除颗粒
三、关键操作步骤
试剂准备?:
冻干标准品需用稀释液复溶
洗涤液按1:25用蒸馏水稀释
加样顺序?:
空白孔→标准品孔→样本孔
每孔依次加入样本/标准品→检测抗体→酶结合物
温育条件?:
37℃避光反应30分钟,严格计时
终止反应?:
加入终止液(2N H?SO?)后立即测定
四、注意事项
避免底物TMB接触金属器械,使用塑料吸头加样
不同批号试剂不可混用,未用完板条需密封防潮
显色后若孔内出现沉淀,需重新离心后测定
实验需设置复孔,CV值应<15%
五、存储与有效期
未开封试剂盒:2-8℃保存(部分组分需-20℃)
有效期通常为6个月,复溶后标准品不可重复使用
注:本试剂盒仅限科研使用,不可用于临床诊断。具体操作参数请以实际试剂盒说明书为准。
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