脂肪酸合成酶（FAS）测试盒

微量法 100T/96S

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理：

FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 光吸收下降速率，计算FAS活性。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体100mL×1瓶，－20℃保存。用前1d取出置于4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1瓶。临用前加入440μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入440μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：液体20mL×1瓶, 4℃保存。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入840μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心40min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后12000g，4℃，离心40min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

FAS测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂四置于40℃水浴中预热30 min。

3. 在96孔板或EP管中依次加入20μL上清液、4μL试剂二、4μL试剂三、164μL试剂四和8μL试剂五，混匀后于340nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。△A测=A1-A2。

FAS活性计算：

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T

=1608×△A÷Cpr

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷W

（3）按细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

（4）按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T

=1608×△A

ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，200μL=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

（1）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(Cpr×V样)÷T

=3216×△A÷Cpr

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T

=3216×△A÷W

（3）按细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=3216×△A÷细胞数量

（4）按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109 )÷V样÷T

=3216×△A

ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5 cm；V反总：反应体系总体积，200μL=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。

上海牧荣生物科技有限公司

1. 国内试剂耗材经销代理。

2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

3. 提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。

4. 进出口货物代理服务。

5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式，为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源，加强网络建设，提高公司内部运作效率，为客户提供方便、快捷的服务。

7. 公司突出创新思维，提高工作效能，减低运作成本，为客户提供优惠的价格。

脂肪酸合成酶（FAS）测试盒