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诺博莱德 链霉蛋bai酶E PronaseE

链霉蛋bai酶E PronaseE   辅助试剂

产品货号：P6148

产品名称：链霉蛋bai酶E PronaseE

英文名称：PronaseE

产品规格：250mg

产品简介：

储存条件：2-8℃，有效期1年

外观(性状)：白色至浅黄色粉末

酶活/效价：效价以实际标签为准

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderP6148 链霉蛋bai酶E PronaseE是一种非特异性蛋白水解酶。常用于提取DNA和RAN时蛋白消化；研究蛋白结构；从纯化的糖蛋白中获得糖肽等。

使用说明（以下操作内容来自公开文献，仅供参考）：

消化蛋白

1. 储存液制备：溶解于去离子水，配制成5-20mg/mL的PronaseE储存液，若用于DNA或RNA分离步骤，建议将溶液56℃加热处理15min，之后37℃孵育1h，此步骤能促使酶发生自消化，以去除DNase和RNase污染。之后将储存液分成单次用量，-20℃冻存。

2. DNA分离：直接加入DNA制备体系（含有0.5-1%SDS以打破DNA-蛋白相互作用），典型Pronase E 工作浓度范围250-500μg/mL，于37℃孵育1-4h。【注意：建议工作浓度范围在250-2000μg/mL，依照具体情况而定】

3.  蛋白水解：溶解约0.2μM蛋白到0.2mL50mM碳酸氢铵缓冲液，pH8.0（或磷酸盐缓冲液，pH7.0），之后按照1%（w/w）加入PronaseE，于37℃孵育24h。根据情况，有可能需要添加4%（w/w）氨肽酶M，并于37℃再孵育18h。

分离小鼠原代造血干细胞

1. 雄性或雌性小鼠被麻醉，并打开腹腔。

2. 肝脏经门静脉灌注Hanks缓冲盐溶液（HBSS），然后灌注PronaseE和胶原酶。

3. 用无菌镊子轻轻取出肝脏，转移到无菌培养皿中。将肝包膜分开，轻轻摇晃肝脏以释放细胞。

4. 将细胞悬浮于含有PronaseE、胶原酶和DNase的溶液中，然后在37℃下消化20min。肝细胞经50g离心3min，两轮分离。

5. 上清在450g下离心获得造血干细胞8min，然后用18%尼基丹（Nycodenz）溶液悬浮沉淀，制备12%Nycodenz、8.2%Nycodenz 和Gey's 平yan盐溶液（GBSS）密度梯度离心。

6. 最终，从8.2%的Nycodenz层中纯化细胞，获得造血干细胞。

注意事项：

1、一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。

2、 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

3、为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

链霉蛋bai酶E PronaseE   辅助试剂

产品订购信息

P6148 链霉蛋bai酶E PronaseE  250mg