上海原代细胞分离实验 返回列表页

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密,不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，即使采用
1mm3的组织块,也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞,必须将现有的组织块
充分散开，使细胞解离出来，常采用的方法如下:

一、悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟,
若悬液量大，可适当延长离心时间,但速度不能太高,延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离
心沉淀用无钙、镁PBS洗两次,用培养基洗一次后, 调整适当细胞浓度后再分瓶培养,若选用悬液中某些
细胞，常采用离心后的细胞分层液，因为，经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,
这样可根据需要收获目的细胞。

二、实体组织材料的分离方法
对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。
(一)机械分散法
所取材料若纤维成分很少，如脑组织，部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内(用九号针)，使细胞通过针头压出,或在不锈钢纱网内用钝物压挤(常用注射器钝端)使细胞从网孔中压挤出。此法分离细胞虽然简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。此法仅适用于处理纤维成分少的软组织。
(二)消化分离法
组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的
桥连结构松动，使团块膨松,由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。