动物哮喘模型 返回列表页

BALB/c小鼠于第0天和第14天分别腹腔注射0.1mL/只OVA液(0.2 mg/mL)和DBP溶液（0.5 mg/kg），第21~23天连续3天以0.5%的OVA溶液雾化激发，每天于上午下午固定时间雾化2次，每次20min。雾化过程中观察小鼠一般行为变化，后一次雾化结束后24小时，小鼠摘眼球取血，取支气管肺泡灌洗液( Bronchial Alveolar Lavage, BALF )及肺组织。
一般行为学观察  观察小鼠在雾化过程中是否出现挠脸、毛发竖立、呼吸急促、烦躁不安、大小便失禁等现象。
血中Eos计数    后一次雾化激发结束24h后，小鼠摘眼球取血，获得血液后立即取出20 μl与380μl 嗜酸性粒细胞稀释液混匀，利用细胞计数板于光学 显微镜下进行Eos计数。
血清中IgE测定   将获得的血液静置2h后，离心，3500 rpm，15min，取血清，按IgE ELISA试剂盒说明书进行测定，并通过样本总蛋白含量进行结果校正。
BALF细胞分类计数  将小鼠仰卧位固定，打开胸腔后，结扎右肺及左侧肺上叶。分离并暴露气管，用适宜针头进行气管插管，以预冷PBS反复灌洗肺组织（0.5 mL/次，共两次），收集BALF，低温离心( 3500 rpm，10min )，取上清，保存于-20℃待测。细胞沉淀用0.2 mL预冷PBS重悬，吹打均匀后取10 μl于细胞计数板上在光学显微镜下计细胞总数，剩余细胞悬液涂片，用快速瑞姬氏染液染色，显微镜下进行细胞分类计数。
BALF中IL-4、IL-5、IL-9、IL-13、IFN-γ的测定  将获得的BALF上清根据相关细胞因子检测试剂盒的说明书进行各指标定量检测，测定结果经总蛋白含量校正。
肺组织中IL-4和IFN-γ的测定  将右侧肺组织用预冷的PBS研磨得15 % 组织匀浆，低温离心，3500 rpm，15min，取上清按照 ELISA 测定试剂盒的操作步骤进行IL-4和IFN-γ测定，并通过样本总蛋白定量来进行校正。
肺组织HE及PAS染色  剪取左肺上叶，置10%中性福尔马林中固定，石蜡包埋，常规石蜡包埋，切片，HE及PAS染色，镜下观察肺组织炎性细胞浸润及黏性蛋白增生情况。