A2780/Taxol人卵巢癌紫杉醇耐药株 含STR鉴定

细胞系特征

细胞株名称：A2780/Taxol

种属：智人

组织来源：人胃癌

生长特性：悬浮生长

微生物及支原体检测：阴性

安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。

培养条件：

*培养基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+0.1ug/ml Taxol GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

传代方法：

收到细胞后，在倒置镜下(是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，低速离心，打开细胞培养瓶，吸出培养液（注意不要吸出细胞），换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 低速离心，弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 按6-8ml/瓶补加*培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中（补加*培养基至8到10ml）。如果没有特别说明，收到细胞后的次传代一般是一传二。

注：1、观察细胞在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系。

冻存方法：

  冻存液：90%胎牛血清，10%DMSO

  储存：液氮储存

问题

原因

解决方案

细胞生长缓慢

生长培养基使用不当

按照生产商的建议，使用相应的预热生长培养基。

生长培养基中血清质量差

使用其他批次血清。

传代操作不当

按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。

换液过于频繁

降低换液频率，参考生产商推荐的换液频率。

细胞传代次数过多

使用传代次数较少的健康细胞。

细胞生长超过汇合状态

哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行，建议细胞密度达 80-90%传代。

细胞被支原体污染

将细胞、培养基和试剂丢弃；新取一只冻存细胞，并且使用新的培养基和试剂。

细胞复苏存活率低

细胞冻存不当

新取一只冻存细胞，并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中，直至复苏。

自行制备的冻存细胞无活性

将细胞按照生产商推荐的密度冻存。

制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。

严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。

新取一只冻存细胞。

细胞复苏方法不当

严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程，只能作为指导原则使用。

确保冷冻细胞解冻迅速，接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。

复苏培养基使用不当

使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。

细胞稀释过度

按照生产商的建议，将解冻后的细胞高密度接种，以改善复苏效果。

处理细胞时动作不够轻柔

冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外)，也不要高速离心细胞。

冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光

如果未避光储存，冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质；新取一只冻存保护剂，重新冻存细胞。