常有ELISA实验人员反映在处理样品时出现溶血、凝集不全、受细菌污染等现象发生,本公司技术员特针对相关常见问题做出总结,下面我们就来看看今天的内容:elisa试剂盒标本处理的哪些问题?
ELISA试剂盒标本采集、处理和保存方式
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一、标本保存不当
在冰箱中保存过久的标本,血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性;标本放置时间过长(如一天以上),有时抗原或抗体免疫活性减弱,亦可出现假阴性。为克服上述干扰,ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定,5天内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。
二、标本溶血
由于各种人为原因引起的标本溶血,均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,会导致非特异性显色,干扰测定结果。为克服上述干扰作用,标本采集时必须注意避免溶血。
三、标本凝集不全
在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下,正常血液采集后1/2~2h开始凝固,18~24h*凝固。临床检验工作中,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清,此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果;这类情况于次日复查时因血凝已*,血清中不再有纤维蛋白原存在,故复查结果变为阴性。为避免上述干扰作用,解决的办法是血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清,或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
四、标本管中添加物质的影响
抗凝剂、酶抑制剂及快速分离血清的分离胶等均对ELISA测定有一定干扰作用。
五、标本受细菌污染
因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,因此,被细菌污染的标本同溶血标本一样,亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
样品的处理在ELISA检测实验中是一项基本工作,也是影响实验的一大主要因素。做ELISA试剂盒样品因素和操作因素之后,确保检测结果的准确性就容易的多了。我公司试剂盒提供全程指导服务,为您的实验负责到底!欢迎您我司业务员。
很多的科研朋友在收到elisa试剂盒后,并不清楚该如何的去保存,其实保存与试验之间是息息相关的,所以这方面可要注意啦。
试剂盒保存方法:
1、不同批号的试剂不要混用。
避免长时间打开盖子以及长时间暴露于光下。
2、不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
3、实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存。
4、加入试剂的顺序应一致。
elisa试剂盒按照标签说明书选用正确的贮存办法,在运用之前要恢复到室温。并且稀释往后的标准品应该丢掉,不要再去保存。
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