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SNU-5-LUC人胃癌荧光素酶标记细胞 处理方法

来源:上海琛艺实业有限公司   2020年06月06日 10:19  

上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司新引进细胞上千株,其中人的已通过STR鉴定的有几百株,欢迎各位选购。。。。。。

产品名称:SNU-5-LUC人胃癌荧光素酶标记细胞 处理方法 含STR鉴定

特点:细胞代数为4代以内,细胞耐药倍数8倍以上;
包装:内层无菌自封袋;防压泡沫盒;外层防压保温气泡袋;说明书
细胞来源:ATCC、sciencell、ICLC
货期:1-2周
运输方式:快递运输
售后:收到细胞后12天,如发现细胞有质量问题(如污染,死亡,快递运输等原因)时,应出具书面质量问题报告并及时通知销售人员,我们将尽快为您解决!

注:耐药细胞培养操作流程和普通细胞培养方法基本一致,只是在培养中会加药维持筛选压力

  • SNU-5-LUC人胃癌荧光素酶标记细胞 处理方法 含STR鉴定
  •  
  • 三、细胞生长条件:

 

  • 组成:

组份

数目

细胞

 1 T-25瓶

细胞说明书

一份

  • 细胞简介:

生长特性:

贴壁生长

 

细胞来源:

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

培养条件

培养基:90%1640培养基 +10%FBS(推荐BI  -04-001-1ACS*胎牛血清)

气相:空气95%,二氧化碳5%

温度:37℃

培养:

  • 贴壁细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代;

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,第yi次传代比例为1:2。

3传代步骤:将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入1mlPBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(第yi次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为消化时间,记录消化时间,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之*脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入*培养基重悬细胞,进行传代。

 

二、悬浮细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒,然后置于无菌操作台,打开瓶口,轻轻吹打后,将其中的细胞悬液转移到离心管中,然后1200rpm离心3min,去上清;

2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鲜培养基,然后将其置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液(离心后去旧液,加入新鲜培养基);

3.显微镜观察细胞数目比较多时,对其进行传代,第yi次传代比例为1:2(离心后平均分成两瓶培养)。

 

细胞总数:

1~3*106

传代周期:

2-3天

传代比例:

1:2~1:4

换液频率:

2-3天

冻存液:

90%FBS+10%DMSO

 


@geraldor:你好,你的意思是紫外线照过之后,实验操作开始了,如果万一发现少拿了什么,就直接酒精喷一下再放进去是吗

@llh12:有时确实是忘记,*怕的就是那种实验已经做到一半忘记了的,或者发现东西不够用的。我们一般是这样处理:耗材、移液枪还有金属器皿之类的,可以喷一下酒精放进来,等酒精风干一下,注意不要和其它东西混杂。反正一般细胞的也有外包装,里面已经是无菌无内毒素。如果是试剂,那就是直接从冰箱拿出来放进来就是。(如果只是实验还没有真的开始,把漏掉的东西加上,再照30分钟就是。)

 

@姚丽佳:请问MHCC97H-GFP-LC3细胞传代前,经过胰酶处理后,加了培养基后不用离心直接分瓶吗?那后面培养的时候不就含有胰蛋白酶了吗?不会产生影响吗?

@llh12:是的,不用离心直接分瓶。之后加入含血清的培养基中止了胰酶作用。如果是贴壁细胞,一般第二天就贴壁了。分瓶后第二天再全部换液。如果是半悬浮细胞,一般都不用胰酶消化,都是直接吹下来。

MHCC97H-GFP细胞

 

1.【无菌环境】 在MHCC97H-GFP-LC3细胞细胞实验之前要注意无菌环境的建立,紫外杀毒灭菌,酒精消毒都是十分有必要的。

2.【镜下检查】 镜下检查结果非常重要,镜检的结果非常重要,要根据你自己的观察进行细胞密度的识别,从而进行细胞传代比例的确定,进行更好的细胞数量的控制,如果实验要求比较高,需要细胞计数板计数。

3.【过火焰】

记住,所有开瓶的东西都要进行过酒精灯外焰,瞬间高温进行灰尘的固定。这样会大大减少染菌几率。

4.【移液工具】

很多人对于移液工具都有偏好,不好说什么就是正确的。但是从无菌角度。使用移液管比微量移液枪减少污染的几率要高。希望大家能用移液管。

5.【交叉污染】

混匀细胞悬液和移取培养基以及血清的工具要分开;还有就是胰酶和血清也要严格分开,否则容易造成交叉感染,使细胞增加染菌几率。

T47D-LUC人乳腺癌细胞-荧光素酶标记
T47D-GFP人乳腺癌细胞-绿色标记
Tca-8113-LUC人舌癌细胞-荧光素酶标记
Tca-8113-GFP人舌癌细胞-绿色标记
TE-10-LUC人食管癌细胞-荧光素酶标记
TE-10-GFP人食管癌细胞-绿色标记
TE-11-LUC人食管癌细胞-荧光素酶标记
TE-11-GFP人食管癌细胞-绿色标记
TE-13-LUC人食管癌细胞-荧光素酶标记
TE-13-GFP人食管癌细胞-绿色标记
U-2OS-LUC人骨肉瘤细胞-荧光素酶标记
U-2OS-GFP人骨肉瘤细胞-绿色标记
U251-LUC人神经胶质瘤细胞-荧光素酶标记
U251-GFP人神经胶质瘤细胞-绿色标记
U87MG-LUC人恶性胶质母细胞瘤细胞

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