HUVEC-C-LUC人脐静脉血管内皮荧光素酶标记细胞 处理方法

HUVEC-C-LUC人脐静脉血管内皮荧光素酶标记细胞 处理方法说明书

现货直销，免费快递送货上门。公司供应各种细胞株，细胞系，种类齐全，现货，质量保证，公司所有产品仅供科研使用，不得用于医学诊断。

细胞名称 
形态特性  上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 
培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
传代方法  1:3传代，3-4天传1次
传代情况 C5
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR 
同工酶 
染色体 
使用权限 未定
运输保存：
采用干冰保存运输。收到细胞时，若干冰已经*融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。
保存条件：4℃保存一年;-20℃长期保存
用途：只可用于科研。
储存：液氮。
运输：干冰(第二代培养末期液氮冻存)。
细胞一般2-3天更换一次培养基，这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。
注意：次植入后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡细胞。到达客户手中，出现任何问题（人为或者非人为），导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。对于细胞的真实性，支持客户检测对应的biomarker，（如证明细胞错误，全额退款。）公司针对每株细胞，鉴定gene background，鉴定完成的细胞可以提供数据，用于证明细胞的真实性，并且帮助客户更多的了解细胞特性。

HUVEC-C-LUC人脐静脉血管内皮荧光素酶标记细胞 处理方法说明书操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。分枝杆菌 RNAout50 次

专业技术人员万工收藏的细胞培养小技巧:

1. 买细胞要去靠谱的地方买，比如 ATCC 或者琛艺实业。一般上面会有针对细胞的介绍，这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

2. 不管是买的细胞，还是别人惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存，冻存细胞复苏后第二天*更换一次培养基。

3. 发现细胞有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。

4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢，比如 BT474，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。

5. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护。胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。