Huh-7/Sorafenib人肝癌索拉非尼耐药株|Huh-7细胞

细胞用途 仅供科研使用：Huh-7/Sorafenib人肝癌索拉非尼耐药株|Huh-7细胞

生长特性 贴壁

细胞背景 生长特性：贴壁生长

微生物及支原体检测：阴性

培养 *培养基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+1ug/ml DDP

血清我们推荐用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞特性

1）来源：人

2）形态：贴壁生长

3）含量：>1x106 个/mL

4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5）规格：T25瓶

Huh-7/Sorafenib人肝癌索拉非尼耐药株|Huh-7细胞

细胞培养步骤 收到细胞后，在倒置镜下(好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量*培养基终止消化。 

3. 按6-8ml/瓶补加*培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的一次传代一般是一传二。

注：1、观察细胞好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系。..

保存 冻存条件：90%*培养液+10%DMSO 

保存条件：液氮存储

常见问题及解决方案 1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间长不宜超过 72 小时）

3.细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。