Capan-2-GFP细胞|人胰腺癌绿色标记细胞 培养步骤

上海琛艺实业有限公司新增细胞库，具有自己的研发细胞培养库，上千株细胞具有STR鉴定，开学大放送，*，同时还有好礼相送，具体欢迎咨询我们销售人员。。。。

产品名称：Capan-2-GFP细胞|人胰腺癌绿色标记细胞 培养步骤 含STR鉴定
·细胞数量： 1*10^6
·细胞种属： 人源
·生长特性： 贴壁
·培养基： DMEM-H
·形态特征： 成纤维细胞样
·传代方法： 1:3传代,2-3天传一代
·培养条件： 胎牛血清至终浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37℃
·细胞描述： 亲本L的亚克隆，是早建立的连续传代细胞之一，L细胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下网眼状空隙和脂肪组织。APRT+，HPRT+。
·细胞冻存： 液氮冻存（冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO）
·细胞运输： 干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）
 
Capan-2-GFP细胞|人胰腺癌绿色标记细胞 培养步骤 含STR鉴定
形态特性 上皮细胞样　 
生长特性 贴壁生长 

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　 
细胞周期分为细胞间期和细胞分裂期，细胞间期较长，而细胞分裂期较短。
细胞间期是为细胞分裂的准备时期，表现为细胞增大，营养物质增多。细胞分裂期则是一个细胞由两个细胞分解为一个细胞的过程。
细胞是生命的基本单位，细胞的特殊性决定了个体的特殊性，因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。细胞生物学已经成为当代生物科学中发展的一门学科，是生物、农学、医学、畜牧、水产和许多生物相关专业的一门必修课程。
依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取 10 ml培养基加至 T25或 T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基， 混 合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。
 
培养步骤：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，*脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右*培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。

操作流程

1、您收到PANC-1人胰腺癌细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml*培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，*后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞*贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含5ml*培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml*培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜*培养基继续培养。

订购说明

PANC-1人胰腺癌细胞发货采取专业的运输包装，并选择快捷的运输方式（顺丰速运或其他空运快递）

 本公司细胞引种来源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等

细胞处理方法：

一、贴壁细胞

1、 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。

2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。

3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。

4、37度平衡1-2小时。

5、用移液管吸取培养基，到50ml离心管中，剩下细胞密度达到80%至90%可以传代，如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。

6、如果肉眼检查上清有细胞，对50ml上清进行离心收集细胞，如果细胞连片状态，弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化（1ml胰酶37度），接种培养。

二、悬浮细胞

1、接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。

2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。

3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。

4、细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒）。

5、1000rpm，5min 离心，用吸管小心吸出上清，加入培养基，重悬细胞。

6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种，加入新鲜培养基，置于 37℃，5%CO2 培养（大部分细胞）。

培养操作：细胞培养操作指南

细胞常见问题分析：细胞培养常见问题分析

细胞在发货前进行质检：

1、细胞存种的活性检测

2、细菌、真菌、霉菌污染物镜检

3、衣原体、支原体检测（荧光法、培养法等）

产品质量保证及售后：

1、 细胞为三代以内，活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好，我们*免费重新发货。

2、 实验过程中若确定是客户问题，客户仅需支付物流和耗材费用，我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。

3、 产品使用过程中，可提供技术上的指导。

使用方法

PANC-1人胰腺癌细胞

一，烧瓶培养的处理程序

在培养瓶中接种细胞并在培养基中*填充培养基以防止运输过程中细胞的丢失。

1、收到后，目视检查培养物是否有微生物污染的宏观证据。

使用倒置显微镜（配备有相位传感器），仔细检查是否有微生物污染的证据。还检查以确定大多数细胞是否仍然附着在烧瓶底部？在运输过程中，培养物有时被粗略地处理，并且许多细胞经常分离并悬浮在培养基中（但仍然是可行的）。

2、如果细胞仍然附着，无菌去除5至10毫升的运输介质。可以节省运输媒介以重复使用。在5%℃的空气中，在37℃下培养细胞，直到它们准备进行传代培养BGC-823人胃腺癌细胞（低分化）没有附着，无菌地移除烧瓶的全部内容物，并以1000rpm离心5至10分钟。取出运输介质并保存。在10毫升这种培养基中重新沉淀颗粒细胞并加入25厘米的烧瓶中。在空气中5%℃下，在37℃下孵育，直至细胞准备进行传代培养。

二、传代程序

体积为75厘米的烧瓶。增加或减少其他尺寸培养容器所需的分离培养基的量。

1、去除和丢弃培养基。

2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液冲洗细胞层，除去所有含有胰蛋白酶抑制剂的血清痕迹。

3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中，倒置显微镜下观察细胞到细胞层分散（取决于胰蛋白酶的批）。

注意：为了避免结块，不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞，等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。

4、加入6～8毫升的完整生长培养基，轻轻吸液，抽吸细胞。

5、在新培养容器中加入适当的细胞悬液等分试样。

6、培养37°C培养基。

推荐栽培比为1:3∶1:4。

介质更新：每周2至3次

三、冷冻保存程序

该协议使用量在75平方厘米的瓶；比例减少或增加的其他尺寸的分离介质的培养容器的数量。

1、去除和丢弃培养基。

2。简要冲洗细胞层0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕迹血清含有胰蛋白酶抑制剂。

3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置显微镜下观察细胞到细胞层是分散的（通常在1到10分钟）。

注意：为了避免结块，不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞，等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。

4、加入6～8毫升的完整生长培养基，轻轻吸液，抽吸细胞。

5。去除胰酶EDTA溶液，将细胞悬液到离心管和旋转约5 1000rpmfor 10分钟。

6、低温保存培养液中的上清液和复苏细胞。

7、将细胞转移至低温瓶，1ml／瓶。

8、低温容器中的细胞Frozen（NalgENα5100-01）。