上海琛艺实业有限公司新增细胞库,具有自己的研发细胞培养库,上千株细胞具有STR鉴定,开学大放送,*,同时还有好礼相送,具体欢迎咨询我们销售人员。。。。
产品名称:Capan-2-GFP细胞|人胰腺癌绿色标记细胞 培养步骤 含STR鉴定
·细胞数量: 1*10^6
·细胞种属: 人源
·生长特性: 贴壁
·培养基: DMEM-H
·形态特征: 成纤维细胞样
·传代方法: 1:3传代,2-3天传一代
·培养条件: 胎牛血清至终浓度为10%。环境:空气,95%;二氧化碳(CO2),5%;温度,37℃
·细胞描述: 亲本L的亚克隆,是早建立的连续传代细胞之一,L细胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下网眼状空隙和脂肪组织。APRT+,HPRT+。
·细胞冻存: 液氮冻存(冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO)
·细胞运输: 干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输(T25瓶)
Capan-2-GFP细胞|人胰腺癌绿色标记细胞 培养步骤 含STR鉴定
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
细胞周期分为细胞间期和细胞分裂期,细胞间期较长,而细胞分裂期较短。
细胞间期是为细胞分裂的准备时期,表现为细胞增大,营养物质增多。细胞分裂期则是一个细胞由两个细胞分解为一个细胞的过程。
细胞是生命的基本单位,细胞的特殊性决定了个体的特殊性,因此,对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。细胞生物学已经成为当代生物科学中发展的一门学科,是生物、农学、医学、畜牧、水产和许多生物相关专业的一门必修课程。
依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取 10 ml培养基加至 T25或 T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基, 混 合均匀,放入37 °C,5 % CO2 培养箱培养。
培养步骤:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,*脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
PS:若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作;将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右*培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度:若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。若密度超过80%,可直接进行传代(方法同上)。
2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入血清及DMSO,冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
操作流程
1、您收到PANC-1人胰腺癌细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml*培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,*后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞*贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml*培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀用5ml*培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)第二天,换用新鲜*培养基继续培养。
订购说明
PANC-1人胰腺癌细胞发货采取专业的运输包装,并选择快捷的运输方式(顺丰速运或其他空运快递)
本公司细胞引种来源:ATCC、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等
细胞处理方法:
一、贴壁细胞
1、 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。
2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。
4、37度平衡1-2小时。
5、用移液管吸取培养基,到50ml离心管中,剩下细胞密度达到80%至90%可以传代,如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。
6、如果肉眼检查上清有细胞,对50ml上清进行离心收集细胞,如果细胞连片状态,弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化(1ml胰酶37度),接种培养。
二、悬浮细胞
1、接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。
2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。
4、细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒)。
5、1000rpm,5min 离心,用吸管小心吸出上清,加入培养基,重悬细胞。
6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种,加入新鲜培养基,置于 37℃,5%CO2 培养(大部分细胞)。
培养操作:细胞培养操作指南
细胞常见问题分析:细胞培养常见问题分析
细胞在发货前进行质检:
1、细胞存种的活性检测
2、细菌、真菌、霉菌污染物镜检
3、衣原体、支原体检测(荧光法、培养法等)
产品质量保证及售后:
1、 细胞为三代以内,活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好,我们*免费重新发货。
2、 实验过程中若确定是客户问题,客户仅需支付物流和耗材费用,我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。
3、 产品使用过程中,可提供技术上的指导。
使用方法
PANC-1人胰腺癌细胞
一,烧瓶培养的处理程序
在培养瓶中接种细胞并在培养基中*填充培养基以防止运输过程中细胞的丢失。
1、收到后,目视检查培养物是否有微生物污染的宏观证据。
使用倒置显微镜(配备有相位传感器),仔细检查是否有微生物污染的证据。还检查以确定大多数细胞是否仍然附着在烧瓶底部?在运输过程中,培养物有时被粗略地处理,并且许多细胞经常分离并悬浮在培养基中(但仍然是可行的)。
2、如果细胞仍然附着,无菌去除5至10毫升的运输介质。可以节省运输媒介以重复使用。在5%℃的空气中,在37℃下培养细胞,直到它们准备进行传代培养BGC-823人胃腺癌细胞(低分化)没有附着,无菌地移除烧瓶的全部内容物,并以1000rpm离心5至10分钟。取出运输介质并保存。在10毫升这种培养基中重新沉淀颗粒细胞并加入25厘米的烧瓶中。在空气中5%℃下,在37℃下孵育,直至细胞准备进行传代培养。
二、传代程序
体积为75厘米的烧瓶。增加或减少其他尺寸培养容器所需的分离培养基的量。
1、去除和丢弃培养基。
2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液冲洗细胞层,除去所有含有胰蛋白酶抑制剂的血清痕迹。
3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中,倒置显微镜下观察细胞到细胞层分散(取决于胰蛋白酶的批)。
注意:为了避免结块,不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞,等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。
4、加入6~8毫升的完整生长培养基,轻轻吸液,抽吸细胞。
5、在新培养容器中加入适当的细胞悬液等分试样。
6、培养37°C培养基。
推荐栽培比为1:3∶1:4。
介质更新:每周2至3次
三、冷冻保存程序
该协议使用量在75平方厘米的瓶;比例减少或增加的其他尺寸的分离介质的培养容器的数量。
1、去除和丢弃培养基。
2。简要冲洗细胞层0.25(w/v)trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕迹血清含有胰蛋白酶抑制剂。
3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中,倒置显微镜下观察细胞到细胞层是分散的(通常在1到10分钟)。
注意:为了避免结块,不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞,等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。
4、加入6~8毫升的完整生长培养基,轻轻吸液,抽吸细胞。
5。去除胰酶EDTA溶液,将细胞悬液到离心管和旋转约5 1000rpmfor 10分钟。
6、低温保存培养液中的上清液和复苏细胞。
7、将细胞转移至低温瓶,1ml/瓶。
8、低温容器中的细胞Frozen(NalgENα5100-01)。
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