NIH-3T3细胞|NIH-3T3-LUC小鼠成纤维荧光素酶标记

上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司新引进细胞上千株，其中人的已通过STR鉴定的有几百株，欢迎各位选购。。。。。。

产品名称：NIH-3T3细胞|NIH-3T3-LUC小鼠成纤维荧光素酶标记

包装：内层无菌自封袋；防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书

细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC

货期：1-2周

运输方式：快递运输

售后：收到细胞后12天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时通知销售人员，我们将尽快为您解决！

?Hepa 1-6细胞 Hepa 1-6小鼠肝癌细胞

?三、细胞生长条件：

一、组成：

组份 数目

细胞 1 T-25瓶

细胞说明书 一份

二、细胞简介：

生长特性： 贴壁生长

细胞来源： 从ATCC/中科院/协和医院等地引进

培养条件： 培养基：1640 +10%FBS（推荐德国BI 04-002-1A

优等胎牛血清）

气相：空气95%，二氧化碳5%

温度：37℃

培养： 一、贴壁细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，di一次传代比例为1:2。

3传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（di一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为佳消化时间，记录佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之*脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入*培养基重悬细胞，进行传代。

二、悬浮细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清；

2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）；

3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，di一次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。

细胞总数： 1~3*106

传代周期： 2-3天

传代比例： 1:2~1:4

换液频率： 2-3天

冻存液： 90%FBS+10%DMSO

四、注意事项：

1 收到细胞后首先观察T-25瓶是否有损坏、漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2 瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养

3 对于贴壁细胞，若大部分细胞漂浮，置于培养箱隔夜观察，大部分漂浮细胞重新贴壁，表明细胞活力正常，继续培养，剩余漂浮的细胞可以去掉；若大部分细胞仍然不贴壁，将漂浮的细胞离心收集，用台盼蓝染色鉴定细胞活力，并与本公司销售人员及时联系。

4 建议客户收到细胞后不同倍镜各拍几张细胞的照片，记录细胞状态，如细胞状态出现问题请于72h内与本公司销售联系，以便于更好的帮您解决问题，超过时间我段，本公司则默认细胞状态良好，不免费对后续细胞状态问题进行售后。

 NIH-3T3细胞|NIH-3T3-LUC小鼠成纤维荧光素酶标记

做细胞实验的同学看过来。

选择上海琛艺生物细胞有3个理由：

1、细胞状态好，形态佳，易成活，是市面上比较好养的细胞之一;

2、物流迅速，复苏好后发货，次日就能到;

3、使用我司推荐的进口品牌血清进行培养实验，效果更佳。

细胞保种心得：

首先，细胞采购的运输形式一般分为两种，一种是直接寄送冻存细胞，一种是复苏后寄送活细胞。前者是由液氮中取出细胞冻存管，采用干冰运输；后者是将细胞复苏至T-25培养瓶中，采用常温运输。两者各有优缺点，di一种方式的优点是可以长途运输，因为细胞在干冰中相对稳定，一般可以保证数周之内不影响细胞活性，但缺点是运输成本高，且细胞复苏是很复杂的过程，如果细胞复苏后状态不佳，则很难界定是来源的问题还是复苏操作的问题；而第二种方式的优点是细胞收到后可以直接通过观察来大体了解细胞状态，并且对运输的要求相对较低，缺点则是只适合短途运输，因为即便运输时培养基中不添加血清，细胞还是会不断增殖，当细胞长满后，细胞的状态会随时间的增加而不断变差。综上，如果是从国外大型细胞库采购，一般采用di一种方法，既能适应长途运输，且大型细胞库的冻存细胞质量普遍较好，在良好的操作下复苏成活率很高；如果是从国内细胞库采购，则一般采用第二种方法，方便收到细胞时能较好掌握细胞状态，并且降低运输成本。

细胞分别针对两种运输方式来谈下对新细胞的处理过程：

对于直接寄送冻存细胞的情况，首先要检查的就是细胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已经没有干冰，则细胞状态可能会收到影响，建议尽快复苏；如果有足量干冰，建议先转移至-80℃冰箱过夜，于第二天按正常流程复苏，即37℃水浴锅中快速融解，低速离心后去除含DMSO的冻存液，换入适合细胞的新鲜培养基，轻柔吹匀后转移至培养皿中，补足培养基；一般贴壁细胞在24h内即可观察到细胞贴壁，从而判断细胞状态，悬浮细胞则复苏后即可观察细胞状态。对于冻存时间较长的细胞，可能需要传代1到2次后，细胞才会调整到正常状态，所以细胞复苏后如果状态不佳，不要灰心，仍要细心培养。

对于复苏后寄送活细胞的情况，则细胞收到后要先检查细胞瓶是否有破损，细胞瓶在运输中很有可能受到碰撞和挤压，导致瓶体受损。如果发现细胞瓶受损，则需要尽快处理，该弃就弃。如果细胞瓶完好，则用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培养箱中静置1-2h。待细胞稳定后，观察细胞状态，并及时记录，因为很多国内细胞库都是可以反馈细胞状态的，如果收到时细胞状态不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。细胞如没有异常，则尽快传代并更换适合细胞的新鲜培养基。由于新细胞一般都是di一次接触，细胞传代过程中尤为需要注意胰酶消化时间，消化时间过短或过长都会影响细胞状态，甚至导致细胞死亡。我建议大家采用低浓度胰酶消化，消化时缩短放培养箱和观察的间隔时间，以便尽可能找到合适的消化时间。

一、实验前准备工作：

1、培养瓶的包被：包被液如多聚赖氨酸（PLL，ScienCell品牌）或纤维粘连蛋白（BPF，ScienCell品牌），以无菌水稀释至2 ug/cm2的浓度包被培养瓶。37度孵箱1小时或4度过夜，从包被好的培养瓶中回收多聚赖氨酸，并用无菌水洗涤培养瓶2遍。包被好的培养瓶不要放置超过24小时，其中的包被液可吸出重复使用2-3次，注意不要污染。

2、*培养基的配置：以内皮细胞培养基（ECM，ScienCell品牌）为例，把配套的胎牛血清（FBS，ScienCell品牌）、生长因子（ECGS，ScienCell品牌）和双抗（P/S，ScienCell品牌）加入基础培养液（ECM，ScienCell品牌）中。重新贴好标签，并混匀培养基。

二、原代细胞复苏方法：

1、从液氮中取出原代细胞冷冻管，迅速投入37～38 ℃水浴中，其间可以轻轻转动细胞，加快融化速度，大约需要1分钟时间。

2、5分钟内用培养基稀释至原体积的10倍以上，加入培养瓶中，再用1ml培养基洗涤细胞冻存管，保证细胞都被加入培养瓶中，静置于孵箱，12-16小时后更换培养基（除去DMSO）。以后每2天换一次液，保证细胞状态良好。

三、原代细胞传代方法：酶消化法

当细胞生长至70-80%左右可以传代，传代比例以1:2或1:3为佳。具体方法如下：

1、弃去培养瓶中培养基，用PBS洗涤培养瓶2遍，加入0.25%的胰酶消化液（Trypsin-EDTA，ScienCell品牌，货号0103），以消化液能覆盖整个瓶底为准。37度孵育4分钟左右，轻拍培养瓶侧面，显微镜下观察细胞消化情况，直到80%细胞呈现圆形。

2、细胞消化好后，加入胰酶中和液（TNS，ScienCell品牌，货号0113），并轻轻摇动培养瓶，形成细胞悬液，然后将细胞和培养基转移至离心管中，1000rpm离心5分钟。

3、弃去上清液，以1-2ml新鲜培养基重新悬浮细胞并吹打均匀，接种于包被好的新培养瓶中，瓶中已有10ml左右的培养基，放入培养箱中培养，每2天更换培养基。