NIH-3T3-GFP小鼠成纤维绿色标记|NIH-3T3细胞

上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司新引进细胞上千株，其中人的已通过STR鉴定的有几百株，欢迎各位选购。。。。。。

产品名称：NIH-3T3-GFP小鼠成纤维绿色标记|NIH-3T3细胞

包装：内层无菌自封袋；防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书

细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC

货期：1-2周

运输方式：快递运输

售后：收到细胞后12天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时通知销售人员，我们将尽快为您解决！

NIH-3T3-GFP小鼠成纤维绿色标记|NIH-3T3细胞

?三、细胞生长条件：

一、组成：

组份 数目

细胞 1 T-25瓶

细胞说明书 一份

二、细胞简介：

生长特性： 贴壁生长

细胞来源： 从ATCC/中科院/协和医院等地引进

培养条件： 培养基：1640 +10%FBS（推荐德国BI 04-002-1A

优等胎牛血清）

气相：空气95%，二氧化碳5%

温度：37℃

培养： 一、贴壁细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，di一次传代比例为1:2。

3传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（di一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为佳消化时间，记录佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之*脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入*培养基重悬细胞，进行传代。

二、悬浮细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清；

2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）；

3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，di一次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。

细胞总数： 1~3*106

传代周期： 2-3天

传代比例： 1:2~1:4

换液频率： 2-3天

冻存液： 90%FBS+10%DMSO

四、注意事项：

1 收到细胞后首先观察T-25瓶是否有损坏、漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2 瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养

3 对于贴壁细胞，若大部分细胞漂浮，置于培养箱隔夜观察，大部分漂浮细胞重新贴壁，表明细胞活力正常，继续培养，剩余漂浮的细胞可以去掉；若大部分细胞仍然不贴壁，将漂浮的细胞离心收集，用台盼蓝染色鉴定细胞活力，并与本公司销售人员及时联系。

4 建议客户收到细胞后不同倍镜各拍几张细胞的照片，记录细胞状态，如细胞状态出现问题请于72h内与本公司销售联系，以便于更好的帮您解决问题，超过时间我段，本公司则默认细胞状态良好，不免费对后续细胞状态问题进行售后。

做细胞实验的同学看过来。

选择上海琛艺生物细胞有3个理由：

1、细胞状态好，形态佳，易成活，是市面上比较好养的细胞之一;

2、物流迅速，复苏好后发货，次日就能到;

3、使用我司推荐的进口品牌血清进行培养实验，效果更佳。

做细胞实验的同学看过来。

专业技术人员万工收藏的细胞培养小技巧:

1. 买细胞要去靠谱的地方买，比如 ATCC 或者上海琛艺。一般上面会有针对细胞的介绍，这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

2. 不管是买的细胞，还是别人惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存，冻存细胞复苏后第二天*更换一次培养基。

3. 发现细胞有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。

4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢，比如 BT474，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。

5. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护。胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。