SK-OV-3（人卵巢癌细胞）（通过STR鉴定）.

名称:SK-OV-3（人卵巢癌细胞）(通过STR鉴定)

别称:SKOV-3 Skov3

种属:人

年龄（性别）:女；64岁

组织来源:卵巢腺癌，腹水转移

生长特性:贴壁细胞

细胞形态:上皮细胞样

背景描述:SK-OV-3细胞是由G·Trempe和L·J·Old于1973年从卵巢肿瘤病人的腹水分离得到。SK-OV-3细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物包括白喉毒素、顺铂和阿霉素均耐受。SK-OV-3细胞在裸鼠中致瘤，且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

生长培养基 McCoy's 5A＋10% FBS(SERANA S-FBS-EU-015)＋1% P/S

推荐传代比例:1:2-1:4

推荐换液频率:2-3次/周

倍增时间:~20-48 hours

SK-OV-3（人卵巢癌细胞）(通过STR鉴定)冻存条件

冻存液：50%基础培养基+40%胎牛血清+10%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

致瘤性:;Yes, in nude mice; forms moderately well differentiated adenocarcinoma consistent with ovarian primary.

抗原表达情况:Blood Type B; Rh+

基因表达情况:Blood Type B; Rh+

保藏机构:ATCC; HTB-77 ECACC; 91091004

SK-OV-3（人卵巢癌细胞）(通过STR鉴定)相关产品延伸.......

※正常情况下，融化后血清的外观颜色应该是？

    血清为动物来源，成分复杂，不同批次间会存在一些外观上的差别。一般情况下，它们的颜色可能是金黄色、红色、琥珀棕色或者是介于三者之间。

※血清应如何保存？

    未拆封的血清应存放于-15至-20℃，避免反复冻融。拆封后的血清应无菌分装成一次的用量并存放于-15至-20℃，在产品质量证书标识的效期内均可使用。2-8℃溶解后建议尽快使用。

※血清的有效期是多久？

    大部分胎牛血清效期是5年，针对每个批次，请通过质检文件确定具体效期日期。

※血清应如何融解？

    从冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化过程中不时旋转（swirling mix）混匀。充分融解后分装或平衡到室温后使用

※为什么有时血清中出现絮状沉淀？是否需要去除？如何去除？

    多种原因可能导致絮状沉淀的形成，好常见的原因之一是融化过程中，脂蛋白聚集所致。该现象一般不会影响产品质量。可以400g离心5分钟，取上清，然后过滤。根据需要选择合适的滤膜孔径，一般好常用的是0.22um PES材质的滤膜。为避免滤膜阻塞，建议离心后取上清加入培养基内一起过滤而不是直接过滤血清。

※为什么存放于冰箱中的血清会出现沉淀？如何避免该现象？

    在2-8°C条件下存放，血清中的多种蛋白或脂蛋白会形成肉眼可见的沉淀，如血纤蛋白（fibrin），单体时处于溶解状态，在冻融过程中会发生聚集，形成肉眼可见的沉淀。但该现象一般不会影响血清的性能。可以400g离心5分钟，取上清，然后过滤。根据需要选择合适的滤膜孔径，一般好常用的是0.22um PES材质的滤膜。为避免滤膜阻塞，建议离心后取上清加入培养基内一起过滤而不是直接过滤血清。为尽量避免出现上述现象，建议血清分装成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反复冻融和融化后的血清在2-8°C条件下长时间放置。

※血清是否需要做灭活处理？

    这取决于您的应用。

    灭活过程中，会导致血清中某些成分被破坏，如氨基酸，维生素，生长因子等。所以只有在您的实验对血清有特殊要求时，才会考虑对血清进行灭活处理。如您的实验对血清中的某种组分敏感，需要去除该组分。好常见的情况是需要去除血清中的补体蛋白，因为补体在机体中参与细胞杀伤，巨噬细胞和淋巴细胞活化，肥大细胞和血小板组胺释放，平滑肌收缩等过程，所以一般在免疫学相关研究中及肌细胞和干细胞的培养过程中需要对血清进行灭活处理。

※如何进行血清灭活处理？

    血清请先按上述“血清应如何融解”中的操作步骤融化和混匀，热灭活时请将血清置于56℃水浴30分钟。为尽量减少热灭活对血清品质的影响，一次灭活的血清体积不宜过大。好好准备同样的容器装相等体积的水（与血清相同温度），灭活时将装有血清和水的容器同时放入56℃水浴, 在装水的容器中放置温度计，加热过程中不时轻轻旋转混匀血清，当温度计显示达到56℃左右，开始计时。56 ℃水浴后，建议马上转移到冰上降温。

※为什么需要对血清进行gamma射线辐照？

    gamma 射线辐照的目的是灭活血清中的病毒，一般情况下，25-40kGy和30-45kGy是常用的辐射剂量。

※如何应对血清的批间差？

    琛艺销售的胎牛血清产品通过严格的质控尽可能缩小批间差，但由于血清本身的特点和来源，无法*避免批间差。客户可以通过做预测试等方式，选择可满足要求的血清批次。

SK-OV-3（人卵巢癌细胞）(通过STR鉴定)

其实，刚刚复苏的细胞就像是刚刚出生的baby，非常脆弱，需要各位小伙伴的细心呵护，不然，细胞就会被我们花样玩死。为了避免细胞不明不白的挂掉，我们就要对细胞的各种习性了如指掌。

1. 俗语道，到什么山上唱什么歌，不同细胞用不同的培养液。此时，就不得不提起培养基里的“四大金刚”—MEM、DMEM、1640、F-12，它们基本参与了90%以上种类细胞的培养过程。

MEM作为带头大哥，能力非常全面，号称是应用好广泛的细胞培养液。

DMEM作为随时紧跟老大MEM的二弟，青出于蓝而胜于蓝，浓度要高出2~4倍，可分为高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型（含葡萄糖1000mg/L）。

老三1640中规中矩，营养成分比较简单，比DMEM少一点糖和谷光甘肽，常用于淋巴细胞的培养。

小兄弟F12常用来支持CHO、Hela和L－细胞生长以及原代大鼠肝细胞和前列腺上皮细胞的培养。MEM和F12 这两种培养基各取1/2，即可形成神经生物学好通用的培养基。

2. 细胞生长的空间密度是细胞培养的关键。具体养细胞时应该摸索细胞喜欢的生长空间密度，既不能让细胞瓶里的细胞因拥挤不堪而萎靡不振；也不能让细胞浓度低于1~5×10^5个/mL而导致“孤独死”（因为细胞的健康生长需要细胞间的连接）。因而细胞接种前，要先通过细胞计数来调整细胞浓度。

3. 当培养的贴壁细胞形态不好时，可在传代时，先倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清都可以）洗涤一次，用滴管吸走，再加入3ml培养基，沿着瓶底轻轻吹打一遍，然后吸走。这时再正式进行消化、吹打。

其次，把吹打下的细胞悬液加入到含有新培养基的培养瓶内，置于培养箱里培养，按时间点观察细胞贴壁情况（10min，20min，30min）。而后迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次，然后加入*培养基培养并观察细胞生长情况以及形态。直至找到细胞较好的形态为止。

4. 至于在培养瓶中加入多少培养基量，则是需要实验汪们自己去摸索的。对于生长快的细胞，易生长的细胞加少一点培养基，细胞形态会更好，但是要注意对换液时间的把握。

5. 如何选择培养瓶。一般，生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，那么采用塑料瓶会比玻璃瓶的效果好；生长速度快的细胞，用玻璃瓶培养的效果会更好。因此，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候（比如细胞刚复苏时或者原代培养），塑料瓶会好一点；而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会好一点。

6. 细胞冻存时，盖子要拧紧，不然复苏水浴时会渗水，造成细胞污染。因而冻存管要选择原配的管子和盖子（不同牌子、型号的管子会有差别），盖子拧紧后好好用封口膜封住。且每支冻存管都要标上细胞的名称、冻存时间，并记录在册，以免后续复苏细胞时，取错细胞。

7. 细胞冻存时要严格进行梯度降温（-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮）。要知道冰火两重天的生活环境只会让娇弱的细胞自爆身亡，谨记：缓降温！但如果真心赶时间时，可以使用细胞冻存盒进行细胞冻存，而后尽快将其转入液氮中。此外，要定期测量液氮罐里的液氮储备，以保证细胞全部浸在液面下。

8. 细胞解冻时，由于冻存管管壁较厚、隔热，而导致水浴时间太长（2min还没融化）时，可以将水浴锅的温度调至40℃左右，可以缩短解冻时间。

9. 提前预定超净台，减少复苏后插在冰盒里等待的时间，可避免细胞房人满为患，超净台使用紧张，复苏1h后，还没有加入新的培养液。（高浓度DMSO防止胞内形成冰晶，冻存时保护细胞，但复苏融解后，浸泡时间太久会对细胞有毒性）

10. 复苏细胞时一定要有耐心，因为有些细胞在复苏一星期后才会真正有起色。因而，尽管细胞在复苏三四天后没有任何动静，也不要轻易倒掉所有细胞，要耐心等待，两周后再做决定。

11. 有关DMSO的一些注意事项：

(1) DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内的离子浓度、减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤程度。

(2) DMSO在溶解过程中会放热，应先与培养基混匀后再加血清，同时冻存液好好提前配置，DMSO现配对细胞的毒性可能更大；

(3) 复苏时，要离心去除DMSO，并用新鲜的培养基洗涤1-2次，注意离心的时候速度不要太快。

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