NCI-H1299-LUC人肺腺癌细胞-荧光素酶标记 细胞培养步骤.

上海琛艺实业有限公司新增细胞库，具有自己的研发细胞培养库，上千株细胞具有STR鉴定，开学大放送，*，同时还有好礼相送，具体联系我们销售人员。。。。

产品名称：NCI-H1299-LUC人肺腺癌细胞-荧光素酶标记 细胞培养步骤

?细胞数量： 1*10^6

?细胞种属： 人源

?生长特性： 贴壁

?培养基： DMEM-H

?形态特征： 成纤维细胞样

?传代方法： 1:3传代,2-3天传一代

?培养条件： 胎牛血清至最终浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37℃

?细胞描述： 亲本L的亚克隆，是最早建立的连续传代细胞之一，L细胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下网眼状空隙和脂肪组织。APRT+，HPRT+。

?细胞冻存： 液氮冻存（冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO）

?细胞运输： 干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）

NCI-H1299-LUC人肺腺癌细胞-荧光素酶标记 细胞培养步骤

形态特性 上皮细胞样　 

生长特性 贴壁生长 

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　 

细胞周期分为细胞间期和细胞分裂期，细胞间期较长，而细胞分裂期较短。

细胞间期是为细胞分裂的准备时期，表现为细胞增大，营养物质增多。细胞分裂期则是一个细胞由两个细胞分解为一个细胞的过程。

细胞是生命的基本单位，细胞的特殊性决定了个体的特殊性，因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。细胞生物学已经成为当代生物科学中发展的一门学科，是生物、农学、医学、畜牧、水产和许多生物相关专业的一门必修课程。

依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取 10 ml培养基加至 T25或 T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基， 混 合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。

培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，*脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右*培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右*培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

上海琛艺是一家专业从事细胞培养相关产品的公司，拥有独立细胞房（可随时约定参观），供应胎牛血清，STR鉴定细胞，感受态细胞等，专业，专注，性价比高，是您Shou选之家。