凝胶色谱凭借其温和的分离条件、可量化的分离效果,已成为现代分离科学中不可少的工具。随着新型填料和检测技术的突破,其在准确医疗、新材料研发等领域的应用前景将更加广阔。
现代凝胶色谱仪通常包含五大模块:
1.输液系统:高压恒流泵(可达5000 psi)确保流动相稳定输送;
2.进样系统:自动进样器支持多样品序列分析;
3.色谱柱:填充球形硅胶或琼脂糖凝胶(粒径3-10μm),理论塔板数可达105/m;
4.检测器:紫外检测器(波长254/280nm)、示差折光检测器(RI)或多角度激光光散射检测器(MALS);
5.数据处理系统:配备GPC软件进行分子量校准与谱图解析。
凝胶色谱仪的测定步骤:
1.样品准备:将待测样品溶解在适当的溶剂中,确保样品溶解且无杂质。对于生物样品,可能需要进行预处理,如离心、过滤等,以去除不溶物和杂质。
2.色谱柱装填:选择合适的凝胶填料,根据实验要求装填到色谱柱中。装填过程中要确保凝胶均匀分布,无气泡和裂缝。
3.流动相选择:根据样品的性质和实验要求,选择合适的流动相。流动相应能够溶解样品,并与凝胶填料相容。
4.样品进样:将准备好的样品通过进样器注入到色谱柱的顶部,确保样品均匀分布在凝胶表面。
5.洗脱与分离:开启流动相,使其通过色谱柱。由于凝胶的分子筛效应,不同大小的分子将以不同的速度在色谱柱中移动,从而实现分离。
6.检测与记录:使用适当的检测器(如紫外检测器、示差折光检测器等)监测流出的液体,并记录各组分的保留时间和峰面积等信息。
7.数据处理与分析:根据记录的数据,计算各组分的相对分子质量、含量等信息,并进行进一步的分析和讨论。

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