氨基酸自动分析仪从样品处理到结果输出的标准化手册

来源：上海纯华生物科技有限公司 2025年06月25日 10:55

　　氨基酸自动分析仪通过离子交换色谱与柱后衍生技术，可实现食品、生物样本中氨基酸的精准定量。本文以蛋白质水解样品检测为例，系统梳理其操作步骤与关键注意事项，助力用户高效完成分析任务。

　　一、前期准备：试剂与仪器校准

　　1.试剂配置

　　缓冲液：按说明书配制pH2.2、3.3、4.0的柠檬酸-磷酸钠缓冲液，0.45μm滤膜过滤后超声脱气15分钟。

　　衍生试剂：称取茚三酮溶于乙二醇甲醚，加入氯化亚锡（抗氧化剂），现配现用，避光保存。

　　标准品：用0.02N盐酸溶解氨基酸混合标准品，配制成0.5-10μmol/L梯度溶液。

　　2.仪器检查

　　开启氮气（压力0.05-0.1MPa）、纯水机及仪器电源，预热30分钟。

　　检查泵头无气泡、色谱柱连接紧密，用超纯水冲洗管路至基线平稳。

　　二、样品处理：水解与衍生化

　　1.蛋白质水解

　　称取50-100mg样品于水解管，加入10mL 6N盐酸及0.5mL苯酚（指示剂），充氮气后密封。

　　110℃水解22-24小时，冷却后过滤，取1mL滤液60℃真空干燥，用0.02N盐酸复溶至10mL，过0.22μm滤膜。

　　2.游离氨基酸提取

　　血清、尿液等液体样品直接与4%磺基水杨酸按1:3混合，4℃离心（12000rpm，10分钟），取上清液稀释至检测范围。

　　三、仪器操作：参数设置与运行

　　1.方法建立

　　在软件中设置梯度洗脱程序：0-10分钟缓冲液A（pH2.2），10-30分钟线性切换至B（pH3.3），30-50分钟切换至C（pH4.0），流速0.45mL/min。

　　衍生温度115℃，检测波长570nm（主）、440nm（副），进样量20μL。

　　2.序列运行

　　将标准品与样品按顺序放入自动进样器，启动序列。仪器自动完成进样、分离、衍生及检测，生成色谱图。

　　四、数据分析与报告生成

　　1.定性定量

　　通过保留时间比对标准品色谱图，定性氨基酸种类；以外标法或内标法计算浓度，回收率需达95%-105%。

　　2.报告输出

　　软件自动生成Excel或PDF报告，包含样品名称、浓度、RSD值及色谱图。异常峰需手动检查是否为杂质或共洗脱峰。

　　五、仪器维护与注意事项

　　1.日常维护

　　每日用超纯水冲洗泵及管路，每周更换保护柱芯，每月校准仪器线性度（R2≥0.999）。

　　2.故障处理

　　若基线漂移，检查茚三酮溶液是否氧化；若峰形拖尾，用0.1N NaOH冲洗色谱柱30分钟。

　　氨基酸自动分析仪通过标准化操作流程，可实现ppb级检测限与±2% RSD的重复性。从样品前处理到数据输出，每一步均需严格遵循参数设置与质量控制要求，以确保分析结果的准确性与可靠性。

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