荧光显微镜通过激发样品内部的某些细胞结构或者分子等,使他们进入到激发态,当它们回到基态时,会释放出可见光区的光,通过放大并检测此荧光来生成图像。因为荧光只从被激发的分子发射出来,所以它可以提供高度选择性的成像能力。
优点:
1、高灵敏度:可检测单分子水平的荧光信号。
2、高特异性:通过荧光标记实现目标分子的选择性观察。
3、多通道成像:可同时检测多种荧光标记。
4、非侵入性:适用于活细胞成像。
缺点:
1、光漂白:荧光物质在持续激发下会逐渐淬灭。
2、光毒性:高强度激发光可能损伤活细胞。
3、背景荧光:样品自发荧光或杂质荧光可能干扰观察。
4、成本高:设备昂贵,维护复杂。
荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。通过荧光标记技术实现了对生物和非生物样本的高灵敏度、高特异性观察。其类型多样,应用广泛,从常规细胞观察到超分辨率成像,均可满足不同研究需求。
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