聚焦 HEK293 相关残留检测，提升生物制品质量控制水平

HEK293细胞系是人胚胎肾细胞系，具有与人类细胞相似的翻译后修饰系统，能够生产出更接近天然人类蛋白的重组蛋白。其在生物制药领域应用广泛，尤其是在细胞和基因治疗（CGT）产品生产中占据重要地位。许多治疗性病毒载体，如慢病毒、腺相关病毒等，都在 HEK293 细胞中生产。随着CGT领域的迅速发展，HEK293及其衍生细胞的应用前景将更加广阔。

WHO和各国药物注册监管机构均对生物制品中外源宿主DNA残留提出了监测和控制要求，以确保生物制品的安全性及质量可控性。

WHO和美国FDA现行指导方针推荐成品中残留DNA不高于10 ng/剂，美国FDA还指出生物制品宿主细胞DNA残留DNA不高于100 pg/剂。欧洲药典通则规定生物制品残留DNA限度大多为不超过10 ng/剂。中国药典2020年版三部规定，以细胞基质生产的生物制剂外源宿主细胞DNA残留量不能超过100 pg/剂，以细菌或真菌基质生产的疫苗DNA残留量不能超过10 ng/剂。

除需对DNA的残留量进行控制外，DNA残留片段大小分布也是确定其相关风险因素的重要指标。有研究表明，一个功能基因至少在200 bp以上，因此大于200 bp有可能会有一定的致病性，而且残留DNA片段越大，生物制品的风险等级越高。

HEK293T细胞是HEK293细胞系的衍生物，通过表达一个温度敏感的SV40大T抗原突变体而建立。SV40是一种致瘤病毒，其大T抗原（LTA）序列和腺病毒E1A序列具有潜在安全性风险。CDE（国家药品监督管理局药品审评中心）颁布的相关指导原则要求，对包装病毒载体用细胞库（如HEK293T细胞）携带的Adv E1A序列和SV40大T 抗原序列等具有潜在安全性风险的特定转化序列，均应进行残留控制。

试剂盒线性范围为：30fg/μL~300pg/μL，R²=1，扩增效率为100.45%，各浓度检测值CV<15%。

图 1.HEK293 DNA标曲线性图（上）和扩增曲线线性图谱（下）

试剂盒含有四种不同长度的扩增片段：82 bp、133 bp、227 bp、515 bp，四片段线性范围均为30 fg/μL~300 pg/μL，R²＞0.99，扩增效率在90%~110%之间，各浓度检测值CV<15%。

图2 .82 bp扩增曲线图谱（上）和133 bp扩增曲线图谱（下）

图3 .227 bp扩增曲线图谱（上）和515 bp扩增曲线图谱（下）

SV40LTA线性范围在1.8×10¹~1.8×10⁵copies/μL，R²=1，扩增效率为100.25%，各浓度检测值CV<15%；

E1A线性范围在1.8×10¹~1.8×105copies/μL，R²=1，扩增效率为100.25%，各浓度检测值CV<15%。

图4 .SV40LTA扩增曲线图谱（左）和E1A扩增曲线图谱（右）