实验室小鼠卵泡膜细胞的培养操作步骤及注意事项！

一、产品信息

平台编号：Bio-129586

规格：1×10?Cells/T25培养瓶

细胞信息：原代细胞

产品名称：小鼠卵泡膜细胞

组织来源：卵巢组织

产品规格：5×10e5cells/T25细胞培养瓶

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞简介

小鼠卵泡膜细胞分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。哺乳动物的卵巢内卵泡的发育需要相关激素的调节才能完成，垂体促性腺激素（卵泡刺激素和黄体生成素）使原始卵泡开始发育，其过程中还产生大量的雌激素。雌激素是卵巢的颗粒细胞和卵泡膜细胞在垂体促性腺激素的作用下协同合成的，卵泡膜细胞合成的雄激素透过基膜进入颗粒细胞，并转变为雌激素。因此，卵泡膜细胞在生殖内分泌调节中占有关键的位置，了解其在病理及生理中的作用，对于与性激素有关的妇产科疾病（如多囊卵巢综合症、卵巢癌等）的研究有着重要意义。在哺乳动物卵泡生长发育的过程中，卵母细胞由不断增加的颗粒细胞层包裹。卵巢组织中的膜细胞作为卵泡的外层细胞可以维持卵泡结构的完整性，参与构成卵母细胞和颗粒细胞发育的微环境且为类固醇激素的生成提供底物。在哺乳动物中调节膜细胞类固醇激素生成的机制已见相关报道，但是有关卵泡膜细胞的聚集、生长和分化的研究尚不深入。

三、方法简介

实验室分离的小鼠卵泡膜细胞采用先机械分离后胶原酶消化结合Percoll密度梯度离心法、并通过专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

四、质量检测

实验室分离的小鼠卵泡膜细胞经3β-HSD免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

五、培养信息

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

小鼠卵泡膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的培养状态。

六、小鼠卵泡膜细胞培养操作

1）复苏细胞：将含有细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面 T25 瓶为类；

1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

七、小鼠卵泡膜细胞培养注意事项

1、收到非红系有核细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件。若由于培养条件不而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待ATCC CRL-1711(Sf9)细胞汇合度 80%左右时正常传代。

5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7、该细胞仅供科研使用。

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