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MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 产品技术

来源:上海易汇生物科技有限公司   2025年07月05日 10:17  
在现代分子生物学研究与生物技术应用中,聚合酶链式反应(PCR)作为一项基础且关键的技术,广泛用于扩增特定 DNA 片段。然而,PCR 反应后产物的纯化对于获取高质量、可用于下游实验的 DNA 样本至关重要。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 是一款基于先进的顺磁性磁珠技术开发的 PCR 产物及下一代文库制备的清洁系统,为科研工作者和生物技术企业提供了高效、可靠的 DNA 纯化解决方案,在基因组学研究、临床诊断、生物制药等众多领域发挥着重要作用。
一、产品技术原理
MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 的核心技术是基于顺磁性磁珠对 DNA 分子的特异性结合与分离。该产品体系中的磁珠表面经过特殊化学修饰,带有能够与 DNA 分子发生相互作用的功能基团。在 PCR 反应结束后的混合体系中,加入 MAGBIO HighPrep PCR 试剂,磁珠随即分散在溶液中。此时,通过调整反应体系的盐离子浓度、pH 值等条件,使得 DNA 分子能够选择性地与磁珠表面的功能基团结合。这种结合主要基于静电相互作用、氢键以及范德华力等多种分子间作用力。例如,在适当的盐离子浓度下,带负电荷的 DNA 磷酸骨架与磁珠表面带正电的功能基团通过静电引力相互吸引,从而实现 DNA 在磁珠表面的吸附。
而 PCR 反应体系中的其他成分,如未反应的 dNTPs、引物、引物二聚体以及盐类等杂质,由于其分子结构和性质与 DNA 不同,无法与磁珠发生有效结合,仍留在溶液中。当将反应容器置于外部磁场中时,结合了 DNA 的磁珠会在外加磁场的作用下迅速聚集到容器的一侧,而含有杂质的上清液则可通过移液器等工具轻松移除,实现了 DNA 与杂质的初步分离。随后,通过适当的洗涤步骤,使用特定的洗涤缓冲液进一步去除磁珠表面残留的杂质,确保 DNA 的纯度。最后,将磁珠从磁场中移出,加入低离子强度的洗脱缓冲液或去离子水,改变溶液的离子环境,破坏 DNA 与磁珠之间的相互作用,使纯化后的高纯度 DNA 从磁珠表面洗脱下来,从而获得可直接用于下游实验的 DNA 样本。
二、产品组成与特性
(一)产品组成
MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 主要由顺磁性磁珠悬浮液、配套的结合缓冲液、洗涤缓冲液以及洗脱缓冲液组成。磁珠悬浮液是核心成分,其中的磁珠具有超顺磁性,即在外部磁场存在时表现出磁性,能够迅速响应磁场发生聚集;而在外部磁场移除后,磁珠又能快速恢复到均匀分散状态,便于与 DNA 充分接触和结合。结合缓冲液用于调整 PCR 反应后混合液的离子强度和 pH 值,创造有利于 DNA 与磁珠结合的环境。洗涤缓冲液则用于在 DNA 与磁珠结合后,去除磁珠表面吸附的杂质,确保 DNA 的纯度。洗脱缓冲液为低离子强度溶液,用于将纯化后的 DNA 从磁珠表面洗脱下来。
(二)产品特性
  1. 高效的 DNA 纯化能力:该产品能够高效去除 PCR 反应体系中的各种杂质,包括未掺入的 dNTPs、引物、引物二聚体以及盐类等。通过优化的磁珠结合与洗脱条件,可实现对 DNA 片段的高效捕获和纯化,使最终获得的 DNA 样本纯度高,A260/A280 比值通常在 1.8 - 2.0 之间,满足绝大多数下游实验对 DNA 纯度的严格要求。

  1. 高回收率:对于长度大于 100bp 的 PCR 扩增子,MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 具有出色的回收率。在优化的实验条件下,回收率可稳定保持在较高水平,确保珍贵的 DNA 样本不被浪费,为低起始量样本的后续研究提供了有力保障。

  1. 灵活的操作方式:该产品既适用于手动操作,方便科研人员在常规实验室环境中进行小批量样本的处理;又可适配多种自动化液体处理工作站,如 Beckman、Hamilton、Tecan、Caliper、Perkin Elmer、Agilent 和 Eppendorf 等品牌的设备。用户可根据自身实验室的设备条件和样本通量需求,选择合适的操作方式。通过与自动化设备结合,能够实现高通量的 PCR 产物纯化,大大提高实验效率,满足大规模基因组学研究、临床诊断样本批量处理等应用场景的需求。

  1. 稳定的性能表现:产品中的磁珠性能稳定,在不同批次之间具有良好的一致性。无论是在手动操作还是自动化平台上使用,都能保证稳定的 DNA 纯化效果和可靠的片段大小选择能力。这使得实验结果具有高度的可重复性,为科研工作的准确性和可靠性提供了坚实基础。

  1. 无需离心和过滤:传统的 DNA 纯化方法常依赖离心或过滤等操作步骤,这些过程不仅耗时费力,还可能导致 DNA 样本的损失或交叉污染。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 采用磁珠分离技术,避免了离心和过滤步骤,简化了实验流程,减少了实验操作过程中引入误差的可能性,同时也降低了样本间交叉污染的风险,有助于获得更高质量的 DNA 纯化产物。

三、实验操作流程
(一)手动操作流程
  1. 准备工作:在进行实验前,确保所有实验器材清洁无污染,准备好 PCR 反应后的产物、MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 试剂(包括磁珠悬浮液、结合缓冲液、洗涤缓冲液和洗脱缓冲液)、移液器及配套吸头、磁力架、离心管等。将磁珠悬浮液充分混匀,使其处于均匀分散状态。

  1. 结合步骤:取适量 PCR 反应产物转移至离心管中,按照产品说明书的比例加入结合缓冲液,充分混匀。随后加入适量的磁珠悬浮液,再次充分混匀,确保磁珠与 DNA 能够充分接触结合。将离心管置于室温下孵育一定时间(通常为 5 - 10 分钟),使 DNA 与磁珠之间的结合反应达到平衡。

  1. 分离与洗涤:将离心管放置在磁力架上,静置 1 - 2 分钟,待磁珠在外加磁场作用下聚集到离心管一侧后,小心吸取并移除上清液,注意避免吸头触及磁珠沉淀。向离心管中加入适量洗涤缓冲液,轻轻晃动离心管或用移液器吹打,使磁珠重新悬浮,以洗涤磁珠表面残留的杂质。再次将离心管置于磁力架上,静置 1 - 2 分钟,移除上清液。重复洗涤步骤 1 - 2 次,确保磁珠表面的杂质被清除。

  1. 洗脱:将离心管从磁力架上取出,加入适量低离子强度的洗脱缓冲液或去离子水,轻轻吹打使磁珠重新悬浮,将离心管置于室温下孵育 2 - 5 分钟,使 DNA 从磁珠表面充分洗脱下来。然后将离心管再次放置在磁力架上,静置 1 - 2 分钟,待磁珠聚集后,将含有纯化 DNA 的上清液转移至新的离心管中,即为纯化后的 PCR 产物,可用于后续实验。

(二)自动化操作流程
  1. 设备设置与试剂准备:根据所使用的自动化液体处理工作站型号,按照其操作手册进行设备初始化和参数设置。将 MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 试剂分别装载到工作站的相应试剂槽中,确保试剂管路连接正确且无气泡。准备好 PCR 反应产物板和用于收集纯化后 DNA 的微孔板。

  1. 方法编辑:在自动化工作站的控制软件中,根据 MAGBIO HighPrep PCR 的操作原理和产品说明书,编辑详细的实验方法。包括设置各试剂的添加体积、混合方式与时间、孵育时间、磁力分离时间以及洗脱步骤等参数。确保方法设置符合实验需求和设备性能。

  1. 运行实验:将 PCR 反应产物板放置在工作站的指定位置,启动自动化程序。工作站将按照预设方法依次完成 PCR 产物与结合缓冲液、磁珠悬浮液的混合,孵育促进 DNA 与磁珠结合,在磁力架上进行磁珠分离与上清移除,洗涤磁珠以及最后洗脱 DNA 等一系列操作步骤。实验完成后,工作站将自动收集含有纯化 DNA 的微孔板,可直接用于下游实验分析。

(三)操作注意事项
  1. 在使用磁珠悬浮液前,务必充分混匀,以保证每次取用的磁珠量准确且均匀。但需注意避免剧烈振荡,防止磁珠团聚或损坏。

  1. 移液器操作要准确、规范,确保各试剂添加量的准确性,尤其是磁珠悬浮液的加入量,会直接影响 DNA 的结合与纯化效果。

  1. 在手动操作的洗涤步骤中,吸取上清液时要小心谨慎,避免吸走磁珠沉淀,导致 DNA 损失。在自动化操作中,要定期检查移液器吸头的安装情况,防止吸头脱落或堵塞影响实验结果。

  1. 不同来源的 PCR 产物可能在浓度、片段大小分布等方面存在差异,在进行大规模实验前,建议进行预实验,优化磁珠用量、结合与洗脱条件等参数,以获得最佳的纯化效果。

  1. 产品中的各种缓冲液应在规定的储存条件下保存,避免污染和变质。一旦发现缓冲液出现浑浊、沉淀或颜色变化等异常情况,应停止使用。

四、应用场景
(一)基因组学研究
  1. 下一代测序(NGS)文库制备:在 NGS 技术中,高质量的 DNA 文库是获得准确测序结果的前提。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 可用于 PCR 扩增后的文库片段纯化,有效去除文库制备过程中产生的引物二聚体、未反应的 dNTPs 等杂质,确保文库中 DNA 片段的纯度和完整性。通过精确的片段大小选择能力,能够筛选出符合测序要求的 DNA 片段,提高文库质量,为全基因组测序、外显子组测序、转录组测序等各类 NGS 应用提供高质量的 DNA 样本。

  1. Sanger 测序:在传统的 Sanger 测序实验中,PCR 产物的纯化是关键步骤之一。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 能够高效去除 PCR 反应体系中的杂质,获得高纯度的 DNA 模板,可显著提高 Sanger 测序的准确性和成功率。尤其在对未知基因片段进行测序或需要对测序结果进行精确分析时,该产品能够有效减少测序峰图中的杂峰干扰,使测序结果更加清晰可靠。

(二)临床诊断
  1. 基因突变检测与基因分型:在临床分子诊断领域,基因突变检测和基因分型对于疾病的早期诊断、个性化治疗方案制定以及遗传疾病的筛查具有重要意义。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 可用于从患者样本(如血液、组织、唾液等)中提取的 DNA 进行 PCR 扩增后的产物纯化。通过去除杂质,提高 DNA 样本的纯度,能够更准确地检测出基因突变位点,为疾病的诊断和治疗提供可靠依据。例如,在肿瘤基因检测中,该产品可帮助检测肿瘤相关基因的突变情况,指导临床医生选择合适的靶向治疗药物。

  1. 病原体检测:对于病原体(如病毒、细菌、真菌等)的 PCR 检测,MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 能够有效纯化 PCR 扩增产物,提高检测的灵敏度和特异性。在临床样本中,病原体的含量往往较低,且可能存在多种杂质干扰 PCR 反应和检测结果。使用该产品进行 PCR 产物纯化,可去除样本中的杂质,富集病原体的 DNA 片段,从而更准确地检测出病原体的存在及其种类,为感染性疾病的诊断和治疗提供有力支持。

(三)生物制药
  1. 重组蛋白表达与纯化过程中的质量控制:在生物制药过程中,利用基因工程技术表达重组蛋白是常见的生产方式。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 可用于对重组蛋白表达载体的构建过程进行监控,通过对 PCR 扩增的目的基因片段进行纯化,确保载体构建的准确性和纯度。在重组蛋白表达后的纯化过程中,该产品也可用于检测和去除可能存在的宿主 DNA 残留,保证重组蛋白产品的质量安全,符合药品生产质量管理规范(GMP)的要求。

  1. 疫苗研发与生产:在疫苗研发和生产过程中,对核酸疫苗或病毒载体疫苗的制备需要高质量的 DNA 或 RNA 模板。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 可用于纯化 PCR 扩增的相关核酸片段,为疫苗的研发和生产提供纯净的核酸原料,确保疫苗的有效性和安全性。同时,在疫苗生产过程中的质量控制环节,该产品可用于检测和分析疫苗中可能存在的核酸杂质,保障疫苗产品的质量稳定性。

MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 凭借其基于磁珠技术的创新设计、高效的 DNA 纯化能力、灵活的操作方式以及广泛的应用场景,为分子生物学研究和生物技术应用提供了有力的技术支持。在不断发展的生命科学领域,合理使用该产品将有助于科研人员和生物技术从业者更高效、准确地开展实验研究和生产工作,推动相关领域的技术进步和发展。



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