QPCR实时荧光定量需要注意哪些参数？

购买 QPCR 实时荧光定量仪时，通常需要重点关注以下几类参数：

一、荧光检测通道相关参数

1、通道数量：

不同的荧光染料需要对应不同的检测通道，常见的如 FAM、VIC、ROX 等染料。如果实验中经常需要同时检测多种目标基因，或者要进行多重荧光定量 PCR 检测，那就需要选择通道数量较多的仪器，比如具有 4 通道、5 通道甚至更多通道的设备，以满足多样本、多指标同时检测的需求。

2、检测灵敏度：

对于低丰度的基因模板，仪器能否精准检测到荧光信号就很关键。灵敏度高的仪器可以检测到极微量的核酸扩增产生的荧光变化，一般以能检测到的拷贝数来衡量，例如有的仪器可以检测到单拷贝甚至更低的起始模板量，这在检测痕量核酸时优势明显。

3、荧光检测线性范围：

它反映了仪器在多大的核酸浓度区间内，荧光信号强度与模板浓度能保持良好的线性关系。较宽的线性范围意味着在检测高浓度和低浓度样本时都能准确进行定量分析，例如线性范围达到 6 - 8 个数量级的仪器，可适应更多不同浓度样本的检测需求，无需对样本过度稀释或浓缩。

二、温度控制相关参数

1、升降温速率：

快速的升降温有助于缩短整个 PCR 反应的时间，提高实验效率。比如升降温速率达到每秒 3℃ - 5℃甚至更高的仪器，相比速率低的设备，可以在更短时间内完成热循环过程，尤其在处理大量样本时能节省不少时间。

2、温度准确性和均匀性：

温度准确性是指仪器实际达到的温度与设定温度的偏差程度，一般要求偏差在较小范围内，如 ±0.1℃ - ±0.5℃，这对于确保 PCR 反应在准确的退火、延伸等温度条件下进行很重要。温度均匀性则关乎仪器不同孔位之间温度的一致性，要保证各个反应孔的温度都能均匀稳定，避免因温度差异导致扩增效率不一致，影响定量结果的准确性。

三、样本通量相关参数

1、反应模块规格：

常见的有 96 孔、384 孔等规格。如果日常实验样本量较大，选择 384 孔的模块可以一次性处理更多样本，减少批次间的误差，提高整体检测效率；而如果样本量相对较少，96 孔模块可能就足以满足需求，且相对更节省试剂等耗材成本。

2、是否支持自动化程度：

部分高级仪器可以与自动化液体处理工作站等设备联用，实现样本加样、反应体系配置等流程的自动化，极大提高工作效率，适合高通量、大规模检测的实验室使用。

四、软件分析功能相关参数

1、数据分析能力：

好的仪器配套软件应具备多种定量分析方法，比如绝对定量、相对定量（如采用 ΔΔCt 法等），还能进行熔解曲线分析、扩增效率计算等，同时可以方便地生成直观的图表，如扩增曲线、熔解曲线等图形展示，便于研究者直接观察和分析实验结果。

2、兼容性和拓展性：

软件要能兼容常见的数据格式，方便与其他实验室管理系统或数据分析软件进行数据交互，并且具备一定的拓展功能，例如后续可以根据新的实验需求添加新的分析模块等。