基于质粒的电穿孔在永生化 T 淋巴细胞中进行高效基因工程

突出

第一次全面表征永生化 T 细胞系 CTLL-2 和 HT-2。

质粒电穿孔可实现高效且具有成本效益的 T 细胞工程。

用于 T 细胞电穿孔的优化转基因启动子和质粒结构。

多功能转基因递送策略简化了 T 细胞工程工作流程。

用于精确 T 细胞工程的高效 CRISPR/Cas9 基因组编辑工具包。

摘要

转基因 T 细胞疗法最近的临床成功凸显了加速 T 淋巴细胞基础研究和功能筛选方法的迫切需要。然而，一种简单且具有成本效益的 T 细胞高效基因工程方法仍然难以捉摸。目前的方法通常依赖于病毒转导，这是劳动密集型的，需要严格的生物安全措施。基于质粒的电穿孔提供了一种经济实惠的替代方案，但在 T 细胞中仍未得到充分探索。此外，原型 T 细胞系的可用性是有限的。在这里，我们通过关注两种永生化小鼠 T 细胞系 HT-2 和 CTLL-2 来应对这些挑战，它们概括了原代 T 细胞的关键特征，包括细胞毒性和细胞因子依赖性增殖。除了广泛使用的 Jurkat T 细胞系外，HT-2 和 CTLL-2 还通过在基于比色皿的系统中通过优化的电穿孔成功高效地转染了单个或多个基因。值得注意的是，质粒构建体的优化能够递送高达 6.5 kb 对的目标基因 （GOI） 大货物，以及通过睡美人转座子系统将 GOI 稳定整合到基因组中。我们还开发了在永生化 T 淋巴细胞中进行 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑的先进方法，实现了高达 97% 的敲除效率和高达 70% 的基于同源定向修复 （HDR） 的靶向敲入效率。我们相信这种基于质粒的优化电穿孔方法将有助于淋巴细胞生物学基础研究的进步，并为 T 细胞疗法的临床前研究提供实用、经济高效的工具。

原标题：Plasmid-based electroporation for efficient genetic engineering in immortalized T lymphocytes  通讯作者：Martin Fussenegger

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