手机版
Ky开元集团手机版
Ky开元集团小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
以下是自动聚焦显微镜的详细操作指南，涵盖通用流程、进阶技巧及常见问题处理：
?? 一、基础操作流程（以生物样本为例）
开机准备
开启主机电源，启动电脑控制软件（如Olympus cellSens/蔡司ZEN）
安装合适物镜（10×观察定位，40×/100×油镜精细聚焦）
载物台调平：放置水平校准玻片，旋转调平螺丝至液滴不流动
样本放置与初聚焦
滴浸没液：油镜用香柏油，水镜用蒸馏水（避免气泡）
粗调焦旋钮抬升载物台，目视下使物镜逼近样本（距离≈0.5mm）
切换自动聚焦：软件点击AF按钮或硬件按AF键
自动聚焦模式选择
模式适用场景操作要点
表面反射AF金属、硅片等反光材料需开启落射光，强度调至70%
透射光对比AF细胞切片、透明薄膜关闭聚光镜虹彩光圈至80%孔径
激光共焦AF厚样本（>50μm）分层聚焦设置Z轴步进0.5-1μm
参数优化（关键！）
灵敏度：调至80-90%（过高易抖动，过低漏检）
搜索范围：设置为预估焦距±20μm（缩短定位时间）
聚焦算法：
明场选梯度大化
荧光选强度峰值（避免光漂白）
? 二、进阶功能应用
多区域自动聚焦（大样本拼接）
步骤：
软件点击创建网格，划分5×5扫描区域
每个区域中心点执行AF并保存Z坐标
启用曲面拟合生成三维聚焦平面
效果：消除载玻片弯曲误差，拼接缝隙≤2μm
时序动态聚焦（活细胞观测）
开启温度CO?维持（37℃/5% CO?）
设置：
聚焦间隔：30秒/次
焦点容差：±0.8μm（避免频繁调整）
防漂移技术：激活硬件闭环反馈（如蔡司Definite Focus）
三维重建操作
?? 三、日常维护与校准
每周维护
物镜清洁：用二甲苯-无水乙醇（7：3）混合液擦拭油镜
载物台导轨：涂抹真空脂（型号：Krytox GPL205）
校准：
使用USAF1951分辨率板校验MTF（调制传递函数）
10×物镜中心偏差≤0.5μm
聚焦失灵处理
故障现象 原因 解决方案
AF反复扫描不停止 样本对比度过低 染色/调节虹彩光圈
焦点周期性抖动 环境振动>5Hz 启用防振台（≥200kg）
Z轴定位偏差＞3μm 线性编码器污染 用无尘布蘸乙醇清洁导轨
? 四、各品牌关键差异
功能 奥林巴斯 蔡司 舜宇
最快AF速度0.3秒（IXplore）0.25秒（Axio） 0.8秒（NE900）
荧光AF通道支持4色激光 支持6色激光 支持3色LED
特色技术 TruFocus温度补偿Definite Focus防漂 SmartStep多算法
? 操作黄金法则
浸没液禁忌：
水镜勿用油，油镜禁用水，否则球差增大3倍！
环境控制：
温度波动≤1℃/h，湿度50%±5%（防止透镜结露）
数据可靠性：
每日使用前用标准微球（如NIST SRM 1960）验证Z轴重复性（RSD＜0.8%）
当自动聚焦失效时，立即切换手动模式并检查：
物镜螺纹是否松动 → 拧紧扭矩0.4N·m
样本是否超出物镜工作距离 → 油镜WD=0.13mm
免责声明
- 凡本网注明“来源：Ky开元集团”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-Ky开元集团合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：Ky开元集团”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非Ky开元集团）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
采购中心
