2D-DIGE定量蛋白质组学

2D-DIGE定量蛋白质组学检测技术服务详情介绍

dànbáizhì组学是一门以dànbáizhì组为研究对象，旨在研究细胞、组织或生物体组成及其变化规律的学科。自从1975年O'Farrell和Klose等人建立双向凝胶电泳技术（2-DE）以来，2-DE技术凭借其高灵敏度和高分辨率、便于计算机进行图像分析处理、可以很好地与质谱分析等鉴定方法匹配等优点成为目前dànbáizhì组学研究的核心手段。

近年来，dànbáizhì组学的研究重点已从dànbáizhì的鉴定到量化转移。定量的dànbáizhì组学研究可定义为多个样品间dànbáizhì丰度相对差异的研究。尽管一些可选择的或互补的dànbáizhì组学技术正在发展，如同位素亲和标签和多维dànbáizhì鉴定技术，但双向电泳仍是当前仅有的可以同时分离大量的复杂的dànbáizhì混合物的关键技术。

传统的双向电泳2-DE在样品制备、电泳条件及凝胶染色等方面难以保证wánquán一致，因此容易产生胶间差异。这种差异会导致试验的重复性不佳，敏感度较低，甚至可能掩盖真实的生物学差异或产生误导性的假阳性结果。为了解决2-DE技术存在的缺陷，1997年Unlü et al提出了双向荧光差异凝胶电泳（Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis，2D-DIGE）。

2D-DIGE 技术的原理是先用不同的荧光染料标记dànbáizhì样品，再使dànbáizhì变性，然后用固定pH梯度凝胶，根据dànbáizhì电荷差异分离出不同pH值的dànbáizhì带，再将此胶条置于含SDS 的聚丙烯酰胺凝胶上，根据dànbáizhì分子量加以分离，并通过多通道激光扫描分析不同dànbáizhì的SDS-PAGE凝胶图像。其主要步骤：用2种不同的荧光染料（Cy2、Cy3 或 Cy5）标记要比较的dànbáizhì样品；等量均匀混合荧光标记后的样品；使用相同的内标，将混合后的样品经双向凝胶电泳进行分离；在荧光显微镜下，用不同的激发波长来检测电泳结果。

图1. 2D-DIGE技术的一般流程

2D-DIGE相较于传统的2-DE具有的显著优势：

• 采用荧光标记技术，能同时比较多个样品，提高了实验效率和准确性。

• 由于荧光标记的引入，使得dànbáizhì的分离和检测更加jīngquè，可以检测到更细微的dànbáizhì差异。

• 引入了内标，更好地消除了试验的偶然误差，避免了不同凝胶之间的差异，极大地提高了结果的准确性和可信度。

• 不需要进行电泳后的固定或脱色过程，减少了dànbáizhì特别是低分子量dànbáizhì的损失。

• 荧光信号的数字化处理使得数据的获取和分析更加快速和准确。

百泰派克生物科技提供SDS-PAGE和2D-DIGE电泳服务，结合Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台与nanoLC-MS/MS纳升色谱，为广大科研工作者提供一站式dànbáizhì组定性及定量服务。

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