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在过去的几十年中,以质谱(MS)为基础的蛋白质组学已经成为鉴定蛋白质-蛋白质相互作用分析(PPIs)的重要技术。蛋白质通过与其它蛋白质或化合物相互作用,形成大分子化合物,从而发挥生物学功能。对蛋白质相互作用的研究能够帮助我们更好的理解蛋白质。当通过IP, CO IP或GST pull-down等蛋白质相互作用分析手段,获得靶标蛋白后,通过质谱分析方法对该蛋白进行分析,鉴定及定量,能够对相互作用蛋白进行表征,进一步对蛋白质功能进行分析。亲和纯化结合质谱分析(Affinity purification combined with mass spectrometry, AP-MS)则允许在特定生理条件下无偏差的对相互作用蛋白进行检测。一种做法是利用SILAC方法分别标记实验组和对照组细胞后进行Co-IP实验,依靠抗原与抗体之间的专一性反应分离得到免疫复合物;再通过LC-MS/MS来定性/定量检测免疫复合物中的蛋白;当实验组与对照组中某个蛋白质的含量达到统计学差异时,判定这个蛋白质与研究的蛋白具有相互作用,可极大降低蛋白质互作假阳性结果可能性。SILAC技术和Co-IP-MS技术结合可用于高通量定量分析在特定情况下蛋白的互作蛋白网。
对Pull-down实验捕获到的细胞中相互作用较低、丰度低的靶蛋白进行质谱鉴定: 用于高通量定量分析在特定生理条件下蛋白的互作蛋白网络分析:免疫共沉淀法(CO-IP)结合质谱联用的蛋白互作分析
GST融合蛋白Pull-down技术结合质谱联用的蛋白互作分析
SILAC与免疫共沉淀结合质谱联用的蛋白互作分析
蛋白质相互作用质谱分析
质谱鉴定相互作用蛋白的两个常用方法是肽指纹图谱分析法(peptide fingerprinting)和niǎoqiāng法蛋白质组学分析法(shot-gun proteomics)。肽指纹图谱分析法,通过SDS-PAGE,对蛋白样品进行分离。聚丙烯酰胺凝胶可以是考马斯亮蓝(coomassie)和银染条带。但是需要样品条带是单一条带,即只含有一个蛋白条带。将切下来的蛋白条带用酶进行消化后,通过质谱进行分析。这些消化后得到的肽段进行质谱分析后,通过与理论数据库进行比对的方式,生物信息学分析拼接得到目的蛋白的信息。肽指纹图谱法的一些局限性在于,该方法需要在切胶过程中得到单一的蛋白条带,如果有杂带将会影响检测的准确性,因为杂带中的蛋白信息可能会掩盖真实的目的蛋白的信息。因此比较适用于较纯的蛋白样品的鉴定。而niǎoqiāng法蛋白质组学分析法的强大之处在于,niǎoqiāng法可以对蛋白混合物进行分析。 niǎoqiāng法蛋白质组学的原理是先将蛋白质样品消化成肽段,然后将肽段通过高效液相色谱(HPLC)法进行分离。分离后的肽段直接进入质谱仪进行分析。质谱分析包括了两个过程,一级质谱(MS1)及二级质谱(MS2)。一级质谱获取高效液相色谱MS1中洗脱的肽的质量-电荷比(m/z)和肽的强度(intensity);二级质谱通过对肽段氨基酸序列进行确定,MS2选择单个肽段对其进行萃裂从而得到该肽段的光谱数据。检索软件根据二级质谱信息与相应的数据库比对,结合匹配度打分及错配过滤,可得到肽段的确切序列,进而拼接出各蛋白的完整序列,从而实现对蛋白的鉴定。 百泰派克生物科技既可以为您蛋白相互作用分析实验后的蛋白样品进行检测,也可以您寄来样品,百泰派克生物科技提供一站式互作蛋白检测,包括蛋白互作实验,IP, CO IP, GST pull-down到蛋白样品质谱分析一站式完成。您只需要将您的需求和样品寄给我们,我们会负责项目后续所有事宜,包括样品前处理、蛋白互作实验、质谱分析、质谱原始数据分析。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析,提供基于质谱的蛋白测序分析服务,包括对蛋白质的氨基酸组成分析,N端测序,C端测序和全序列分析,以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质,提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务,对蛋白序列进行分析。
※服务优势:
1.采用目前世界上优良的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;
3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;
4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;
5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug,即可完成检测;
6.测序不受N端封闭,PEC和和糖基化等N端修饰的影响。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC,提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务,助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。
※服务优势:
1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析,发现新的生物标记物;
2.体内体外多种蛋白质标记方法,适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;
3.质谱分析灵敏度高,实验结果重复度高;
4.可检测较低丰度蛋白,线性范围广;
5.zhuānyè生物信息学分析,分析更系统准确。
百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析,采用金属元素标记物(通常是金属元素标记的特异抗体)标记细胞表面和内部的分子,然后用流式细胞原理分离单个细胞,再用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析单个细胞的原子质量谱,zuì后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。
※服务优势:
1.技术优良,*技术空白
采用金属标记抗体技术,避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征,百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。
2.分析数量大,成本较低
单细胞RNAseq受成本等因素限制,所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右,而流式质谱技术一次(单样本)就可分析至少10^5的细胞,实现了数量级的提高,且成本不高于单细胞RNAseq。
3.应用前景大
①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化,在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景;
②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外,质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰;
③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析,可从zuì小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究,旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案,深入挖掘未知的靶标。
百泰派克基于高分辨率质谱技术,MALDI TOF,高效色谱分离技术,提供一系列完善的生物药物分析方案,从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析,到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务,帮助生物医药生产商提高生物药物品质。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则,通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证,建立了完备的质量体系,数据冷热/异地备份,设备定期计量/期间核查,软件审计追踪,为客户提供一体化解决方案和技术服务,支持新药研发、药物申报注册和生产放行。
1.公司采用ISO9001质量控制体系,zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务;
2.获国家CNAS实验室认可,为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务;
3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等;
4.七大质量控制检测平台,满足您一站式服务需求;
5.服务3000+企业,10000+客户的选择;
6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!
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