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诺博莱德  T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase

T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase   核酸检测

产品货号：T9298

产品名称：T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase

英文名称：T4 DNA ligase

产品别名：T4 DNA连接试剂盒

产品规格：60U

产品简介：

储存条件：Store at -20℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderT9298  T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase特性：

高效连接粘性末端和平末端

T/A 克隆

dsDNA 切刻修复

构建高丰度克隆文库

RNA 和 DNA 的连接

概述：

该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5′-磷酸末端和 3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。

来源：

纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

反应条件：

1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液

[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP]。推荐 DNA 5′ 末端浓度为 0.1-1.0 μM，16℃ 温育。

热失活：65℃ 10 分钟。

单位定义（粘性末端活性单位）：

1 单位指在 20 μl 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16℃ 反应条件下，30 分钟能使 50% 的经 HindⅢ 消化的λDNA 片段 [ 5′ 端浓度为 0.12 μM（300 μg/ml）] 连接所需的酶量。

注意事项：

与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同，T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。

稀释后的 T4 DNA 连接酶应于 -20℃、50% 甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001）中保存。如稀释后马上使用，也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。

只要在反应体系中补加 1 mM ATP，连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液或在T4 DNA 多聚核苷酸激酶反应缓冲液中进行。

使用示例：

1、先将 10×T4DNALigaseBuffer 在冰上融化，并进行短暂的离心。

2、以 20μL 连接体系示例，在无菌微量离心管中加入以下各种成分：

【注】：平末端载体与DNA片段进行连接时，应先将载体进行去磷酸化处理，以防发生自连接现象。为提高连接效率，每20µL反应体系中可以加2µL50%PEG4000。

3、16℃连接过夜。

4、转化实验

1）将连接产物加入到100µL 感受态细胞中（连接产物不应超过感受态细胞的1/10），轻弹混匀，冰上孵育30min。

2）将离心管于42℃，热激90sec（不要晃动），之后立刻置于冰水浴静置2-3min。

3）向离心管中加入900µLLB或SOC培养基，37℃，150rpm，振荡培养45min，该过程使菌体复苏，抗性基因表达。

4）2500 g 离心5min，吸去900µL上清，用剩余培养基重悬菌体，用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。

【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率＞108cfu/µg），可直接吸取100-200µL37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周内均可重新涂板。

注意事项：

1、10×T4DNALigaseBuffer 中含有 ATP，为避免 ATP 的降解，建议解冻后分装冻存于-20℃。

10×T4 DNA Ligase Buffer 在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。

2、平末端的载体与 DNA 片段连接时，应首先对载体进行去磷酸化，以防止载体自身环化。

注意：如果向反应体系中加入 PEG 可以促进平末端的连接，但 PEG 可能导致cDNA 片段克隆产物 出现串联体并抑制包装的反应。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4、本产品仅作科研用途！

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产品订购信息

T9298  T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase  60U