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NAD-苹果酸酶试剂盒 辅酶Ⅱ系列

参  考  价面议
具体成交价以合同协议为准

产品型号BF6008

品       牌NobleRyder/诺博莱德

厂商性质经销商

所  在  地北京市

更新时间:2025-04-07 08:58:09浏览次数:130次

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供货周期 现货 规格 100T/96S
货号 BF6008 应用领域 环保,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药
主要用途 ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。
ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME 催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙酮酸和CO2,以及伴随NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢的关键酶。 ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。
NAD-苹果酸酶试剂盒 辅酶Ⅱ系列


NAD-苹果酸酶(Malic enzymeNAD-ME试剂盒说明书

微量法 100 /96 

 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME 催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙酮酸和CO2,以及伴随NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢的关键酶。 ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测定较多,已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同,可将ME 分为NAD-ME(EC1.1.1.38)NADP-ME(EC1.1.1.40)。

测定原理:

NAD-ME 催化NAD+还原成NADH,在 340nm 下测定NADH 增加速率。

NAD-苹果酸酶试剂盒  辅酶Ⅱ系列

组成:

产品名称

BF6008-100T/96S

Storage

提取液:

100ml

4℃

试剂一:液体

20ml

4℃

试剂二:液体

10ml

4℃

试剂三:粉剂

1

-20℃

说明书

一份

 










具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准



自备仪器和用品:

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 ml 石英比色皿和蒸馏水。

样本的前理:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(ml) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、检测工作液的配制:用时在试剂三中加入 15ml 试剂一和 1ml 蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、测定前将检测工作液在 37℃(哺乳动物) 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μl 样本、55μl 试剂二和 160μl 工作液,混匀后立即记录 340nm处初始吸光值A1 和 1min 后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。 注意:如果ΔA<0.005,可将反应时间延长到 2 分钟或 5 分钟。

NAD-ME 活性计算:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1) 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-ME(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T= 3617×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2) 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g 组织每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-ME(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T = 3617×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-ME(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T =7.234×ΔA

V 反总:反应体系总体积,2.25×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径, 1cm;V 样:加入样本体积,0.01 ml;V 样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

b.  96 孔板测定的计算公式如下

(1) 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-ME(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V ) ÷T= 7234×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2) 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g 组织每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-ME(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×W) ÷T = 7234×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-ME(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×500) ÷T =14.468×ΔA

V 反总:反应体系总体积,2.25×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol;d:96 孔板光径,0.5cm V 样:加入样本体积,0.01 ml;V 样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量;500:细菌或细胞总数,500 万。

NAD-苹果酸酶试剂盒  辅酶Ⅱ系列


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