谷an酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase，GDH）试剂盒说明书

微量法 100 管/96 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷an酸合成酶（GOGAT）共同参与谷an酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。

测定原理：

GDH 催化NH4⁺、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷an酸和 NAD⁺，引起 340nm 吸光度下降。通过测定 340nm 吸光度的下降速率，计算 GDH 活性。

谷an酸脱氢酶试剂盒   氮代谢系列-常备现货

组成：

试剂三：粉剂×1 瓶，-20 ℃保存，用时加入 4ml 蒸馏水，混匀，用不完的试剂 4℃保存一周；试剂四：粉剂×1 瓶，4 ℃保存，用时加入 4ml 蒸馏水，混匀，用不完的试剂 4℃保存一周；

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

（1） 在试剂二中加入 10ml 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；

现配现用（配好后 12h 内用完）；

（2） 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μl 样本和 190μl 试剂二，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值A1 和 5min20s 后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

GDH 活性计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）中 GDH 活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=643×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min/10⁴ cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.286×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0.01 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）中 GDH 活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min /ml）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=1286×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=1286×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GDH（nmol/min /10⁴ cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=2.572×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm； V 样：加入样本体积，0.01 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

谷an酸脱氢酶试剂盒   氮代谢系列-常备现货