锰过氧化物酶（Manganese peroxidase，Mnp）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

锰过氧化物酶（EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。

测定原理：

锰过氧化物酶在 Mn²⁺存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在 465nm 有特征吸收峰。

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试剂组成和配制：

需自备仪器和用品：

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、恒温水浴锅。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

酶液提取：

1、组织：按照质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1ml 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。

2、细胞：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g离心 10min，取上清置于冰上待测。

3、培养液或其它液体：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 465nm，蒸馏水调零。

2、测定前将试剂一、二、三、四在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置 10min 以上。

在 1 ml 玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录 465nm 下 30s 时的吸光值A1 和2min30s 后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。

注意事项

若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液，在 37℃（哺乳动物）或 25℃

（其它物种）放置 10min 以上，测定时加入 100µl 样本和 900µl 混合液测定。

酶活计算公式：

1．按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。 MnP 活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr 2．按照样本质量计算

酶活性定义：每克样品每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP 活性（nmol/min/g 鲜重）= [ΔA×V 反总÷（ε×d）×109] ÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 413×ΔA÷W 3．按照细胞数量计算

酶活性定义：每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP 活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109] ÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T= 413×ΔA÷细胞数量

4．按照液体体积计算

酶活性定义：每毫升培养液每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP 活性（nmol/min/ml）= [ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T= 413×ΔA

ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1×10-3L； V 样：反应中样本体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，2min

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