磷脂酶D（ Phospholipases D，PLD ）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

磷脂酶 D（EC3.1.4.4）即磷脂酰dan碱水解酶，是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称，广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中，具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

测定原理：

磷脂酶D 催化水解磷脂酰dan碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和dan碱，dan碱在dan碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢，过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将 4-氨基安替bi林和重蒸酚氧化成粉红色物质，在 500nm 处有特征吸收峰。

磷脂酶D试剂盒   脂肪酸系列-常备现货

组成：

试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 3ml 无水乙醇充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、恒温水浴锅，无水乙醇。

酶液提取

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml 试剂一。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml 试剂一。

3. 血清：直接测定。

测定操作

磷脂酶D试剂盒   脂肪酸系列-常备现货