微孔板/酶标板使用全指南

　　一、基本结构与分类

　　微孔板(酶标板)通常由多个微孔组成，用于容纳待测样品、控制品和标准品等。根据不同的分类标准，酶标板有以下几种类型：

　　1. 按孔数分类

　　96孔板?：常用规格，兼容大多数酶标仪

　　48孔板?：适合小规模实验

　　384孔板?：用于高通量筛选

　　2. 按底部形状分类

　　平底?：折射率低，适合酶标仪检测

　　U型底?：方便加样、吸样、混匀操作，可直接目测观察

　　V型底?：适合精确吸取样品

　　3. 按结合能力分类

　　高结合力?：蛋白结合能力300-400ng IgG/cm?，适合低浓度抗原/抗体

　　中结合力?：蛋白结合能力200-300ng IgG/cm?，适合大分子蛋白

　　氨基化?：特殊表面处理，适用于特定实验需求

　　4. 按颜色分类

　　透明?：用于常规酶联免疫实验

　　黑色?：抑制背景荧光，提高荧光检测灵敏度

　　白色?：适用于弱光化学发光检测

　　二、标准操作流程

　　1. 准备工作

　　将仪器置于平稳台面，接通电源并预热30分钟

　　检查酶标板完整性，确保无破损、无污染

　　准备待测样品，根据需求进行稀释、调节pH等工作

　　2. 加样操作

　　使用加液器准确加样，加液头不能混用

　　每个孔的加样量应保持一致，避免误差

　　加入阴性对照和阳性对照各3孔和1孔

　　3. 孵育阶段

　　摇动反应板使样品充分混合

　　置于37℃培养箱或水浴中20分钟

　　严格控制温度和时间，确保实验条件一致

　　4. 洗涤步骤

　　用蒸馏水稀释洗涤液(15ml→300ml)

　　手工洗涤时倒出孔中内容物，充满洗涤液静置30秒，重复5次

　　机洗需要执行5次，每孔注入200μl洗涤液

　　5. 酶标工作液添加

　　向每个孔添加100μl酶标工作液

　　37℃反应20分钟后再次洗板5次

　　6. 显色与终止

　　加入50μl底物，37℃避光显色10分钟

　　加入终止液终止反应

　　操作应迅速准确，避免影响结果

　　7. 读数分析

　　使用酶标仪读取吸光度值

　　根据实验要求处理和分析数据

　　记录实验条件、操作过程和实验数据

　　三、关键注意事项

　　1. 材质与化学兼容性

　　聚苯乙烯(PS)材质不耐有机溶剂和强酸强碱

　　避免紫外线照射导致变色

　　聚丙烯(PP)材质更耐化学腐蚀

　　2. 无菌操作要求

　　使用应在无菌条件下进行

　　使用前后需仔细消毒和清洁

　　某些微孔板需确认是否可高温灭菌

　　3. 操作规范

　　避免直接触碰反应孔

　　保持实验环境清洁

　　酶标板避免强烈物理冲击和振动

　　4. 设备维护

　　定期对酶标板进行校准和验证

　　保持干燥清洁，避免潮湿和灰尘

　　使用后及时清洁仪器表面和内部组件

　　四、特殊应用技巧

　　1. 荧光检测

　　黑色酶标板可抑制孔间荧光交叉干扰

　　孔间平整性需控制在±5µm以内

　　适用于细胞因子分泌检测等应用

　　2. 化学发光

　　白色酶标板可增强弱光信号

　　需配合化学发光检测模式

　　注意背景值控制

　　3. 可拆卸板使用

　　便于清洗、存储和重复使用

　　可灵活调整使用孔数

　　兼容大多数酶标仪和洗板机

　　通过规范操作和合理选型，微孔板/酶标板可满足从常规ELISA到高通量筛选的各类实验需求，确保实验结果的准确性和可靠性。

　　注：以上资料仅供参考，完整操作请以实说明为准，不同品牌可能存在细节差异?。

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