多胺氧化酶（Polyamine oxidase，PAO）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

多胺氧化酶是催化生物体内多胺氧化的关键酶，通过调节体内多胺水平和生成物的浓度，参与各种植物体对逆境胁迫的反应和生长发育过程。

测定原理：

PAO 催化多胺氧化产生过氧化氢，在过氧化氢酶存在的条件下与底物显色，在 550nm 下有特征吸收峰，通过测定吸光值增加速率来反映 PAO 活性。

多胺氧化酶试剂盒  抗氧系列-常备现货

组成：

自备仪器和用品：

分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

PAO 活性计算：

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每mg 组织蛋白在每ml 反应体系中每分钟A550 变化 0.002 为一个酶活力单位。

PAO（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.002÷T =166.67×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算：

单位定义：每g 组织在每ml 反应体系中每分钟 A550 变化 0.002 为一个酶活力单位。

PAO（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中每分钟A550 变化 0.002 为一个酶活力单位。

PAO（U/10⁴ cell）＝ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.002÷T =0.333×ΔA

（4） 按液体体积计算

单位的定义：每ml 液体样本在每ml 反应体系中每分钟A550 变化 0.002 为一个酶活力单位。

PAO（U/ml）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.002÷T =166.67×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；V 样：加入样本体积，0.1 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

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