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乙醇脱氢酶活性测定试剂盒 辅酶Ⅰ系列

参  考  价面议
具体成交价以合同协议为准

产品型号BE6016

品       牌NobleRyder/诺博莱德

厂商性质经销商

所  在  地北京市

更新时间:2025-04-04 16:37:31浏览次数:117次

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供货周期 现货 规格 100T/96S
货号 BE6016 应用领域 环保,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药
主要用途 乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒
ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH 主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH 释放到血清中。血清ADH 活性高低反映了肝功能是否异常。
乙醇脱氢酶活性测定试剂盒 辅酶Ⅰ系列


乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒说明书

微量法 100T/96S

 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH 主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH 释放到血清中。血清ADH 活性高低反映了肝功能是否异常。

测定原理:

ADH 催化NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD+NADH  340nm 处有吸收峰,而 NAD+没有;测定 340nm吸光度下降速率,来计算ADH 活性。

乙醇脱氢酶活性测定试剂盒 辅酶Ⅰ系列

组成:

产品名称

BE6016-100T/96S

Storage

试剂一:液体

1

室温

试剂二:液体

1

4℃

试剂三:粉剂

2

-20℃

试剂四:液体

1

4℃

说明书

一份

试剂三:粉剂×2 瓶,-20℃保存,临用前每瓶加入 9ml 试剂二,现配现用。

自备仪器和用品:

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液器和蒸馏水。

粗酶液提取

1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(ml) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(ml) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加 1ml 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);16000g 4℃离心 20min,取上清液置冰上待测。

3、血清等液体:直接测定。

ADH 测定操作

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三在 25℃水浴中保温 30 min

3. 在微量石英比色皿/96 孔板中依次加入 20μl 样本上清液、160μl 试剂三和 20μl 试剂四,迅速混匀后于340nm 测定吸光值变化,分别记录 15s 75s 时吸光值,分别记为 A1 A2。△A 测定管=A1-A2

计算公式

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1) 按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADH  1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(Cpr×V )÷T

=1608×△A ÷Cpr

(2) 按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADH  1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/g 鲜重) =(△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=1608×△A ÷W

(3) 按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol NADH  1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

(4) 按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化 1nmol NADH  1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷V ÷T

=1608×△A

ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积,200μl=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/ml;W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μl=0.02 ml V 样总:提取液体积,1 ml;T:反应时间,1min。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

(1) 按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADH  1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(Cpr×V )÷T

=3215×△A÷Cpr

(2) 按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADH  1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/g 鲜重) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=3215×△A÷W

(3) 按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol NADH  1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

=3215×△A÷细胞数量

(4) 按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化 1nmol NADH  1 个酶活单位。

ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷V ÷T

=3215×△A

ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96 孔板光径,0.5 cm;V 反总:反应体系总体积,200μl=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/ml;W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μl=0.02 ml V 样总:提取液体积,1 ml;T:反应时间,1min。


乙醇脱氢酶活性测定试剂盒 辅酶Ⅰ系列


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